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肺癌患者中血清中細胞因子的检测及临床意义
肺癌患者中血清中细胞因子的检测及临床意义
原发性支气管肺癌简称肺癌,按照组织细胞学类型将其分为两类:代表神经内分泌细胞恶性转化的小细胞肺癌(SCLC)和上皮细胞来源的非小细胞肺癌(NSCLC)。这两大类之下又可分出许多细胞类型,腺癌和鳞癌最为多见,肺间质来源的淋巴瘤、类癌瘤等组织类型少见。肺癌是目前全球范围内死亡率最高的恶性肿瘤,全球每年新增病例达120万例。肺癌的发生发展过程中机体的免疫反应及各种细胞因子发挥着重要的作用。细胞因子是由免疫效应细胞经刺激而合成、分泌的,具有生物活性的一类蛋白质或者多肽。辅助性T细胞(Th)对机体免疫系统有重要的调节作用,根据其分泌的细胞因子的类型,主要分为Th1、Th2和Th3三种细胞亚群,其中Th1细胞主要分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α等细胞因子,介导细胞免疫应答;Th2细胞主要分泌IL-4、IL-6、IL-10等细胞因子,介导体液免疫应答。在正常生理情况下,Th1、Th2细胞处于相互抑制和相互转化的平衡状态,一旦平衡被打破,机体就处于Th1优势和Th2优势的漂移状态,继而发生各种生理反应,甚至出现肿瘤。近年来,许多体内或体外实验证实FGFs-FGFRs信号通路可能参与肺癌细胞的分化、凋亡、生存、迁徒以及血管新生;新生碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是成纤维细胞有丝分裂原靶细胞,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的受体(FGFRs)也分布于上述的相应细胞表面。研究证实肿瘤的浸润和转移首先要通过细胞外基质(ECM)和血管基底膜(BM)构成的屏障。参与ECM和BM降解的主要酶类为基质金属蛋白酶(MMPs)、丝氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶等。基质金属蛋白酶(MMPs)是一类活性依赖于锌离子和钙离子的蛋白水解酶,主要的生理功能是降解细胞外基质(ECM)和血管基底膜(BM)成分。其中明胶酶A(MMP-2)和明胶酶B(MMP-9)参与降解IV型胶原纤维过程而备受研究者的关注,而基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)特异性的抑制基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性。本研究通过比较肺癌患者和健康人群中Th1、Th2及bFGF等血清细胞因子表达情况,探讨肺癌患者免疫功能情况。
1 资料与方法
1.1 研究对象
肺癌组收集2013年2月—2014年2月我院住院的60例肺癌患者的血清标本,所有患者均经电子气管镜或经皮肺穿刺活组织病理确诊,收集标本时患者均未接受手术、化疗、放疗治疗。参与试验患者排除条件:①已经放、化疗治疗的患者;②COPD、哮喘、肺心病、肺间质纤维化患者;③有明确结缔组织疾病的患者;④冠心病、糖尿病病史。选择我院体检中心60例健康人的血清标本作为对照组。
1.2 试剂及仪器
1.3 方法
1.3.1 样本收集
普通生化管采集空腹静脉血4-5ml,3000r/min低温离心5min,取上清液,-20℃保存。
1.3.2 细胞因子检测
1.3.2.1 血清Th1和Th2细胞因子检测
按照流式细胞术微球阵列试剂盒(CBA试剂盒)说明书配制x种细胞因子微球混合液,每次实验均设立标准管和阴性对照管。在试管中加入x中混合微球液及藻红蛋白(PE)荧光染液个50ul,再取50ul血清加入试管中,充分混匀后室温避光反应3h,加入1ml洗液,2000r/min离心5min,弃上清加120ul洗液混匀3-5min后立即上流式细胞仪进行数据采集,采用BD公司CBA软件分析结果。
1.3.2.2 血清bFGF、MMP-9和TIMP-1含量检测
采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清bFGF、MMP-9和TIMP-1含量,操作过程严格按照试剂盒说明书。
1.4 统计处理
2 结果
2.1 临床特征
对照组为体检合格的健康者,共入组60人,其中男性35人,女性25人,年龄28-64岁平均年龄(48.3±14.2),中位年龄为55岁。肺癌组共入组患者60例,其中男性32例,女性28例;年龄28-65岁,平均(47.1±12.3)岁,中位年龄为56岁。肺癌I/II期为27例,III/IV期为33例。结果见表1。
表1 对照组与肺癌组临床特征
组别
例数
男/女
年龄(岁)
中位年龄
吸烟(是/否)
对照组
60
35/25
48.3±14.2
55
31/29
肺癌组
60
32/28
47.1±12.3
56
39/21
2.2 血清Th1和Th2细胞因子检测结果
组别
例数
Th1
Th2
IFN-γ
IL-2
TNF-α
IL-4
IL-6
IL-10
对照组
60
3.22±1.02
4.32±0.85
5.32±1.32
3.33±0.74
6.03±2.02
4.83±1.23
肺癌组
60
7.34±2.34
2.43±0.65
2.98±0.94
6.43±1.32
12.36±2.45
3.64±1
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