胃轉安方治疗胃癌前病变大鼠的端粒酶活性的影响以及安全性的研究.doc

胃转安方治疗胃癌前病变大鼠的端粒酶活性的影响 以及安全性的研究 刘华一1 陈 伟2 王 蓉1 王秀娟1 江海涛3 1天津市中医药研究院附属医院 2天津中医药大学 3天津中医药大学附属第二医院 中图分类号：R735.2 文献标识码：A 文章编号：1818－0086（2009）03 摘 要： 目的 观察胃转安方对胃癌前病变大鼠胃组织以及正常组织骨髓和睾丸的端粒酶活性的影响，进一步深入探讨中药治疗胃癌前病变的作用机理，以及胃转安方在长期的服用过程中可能存在的不良反应，为临床治疗提供科学的理论依据。方法 采用N-甲基-N硝基-N亚硝基胍（MNNG）诱导的综合造模法，建立PLGC大鼠模型，并设立正常对照组，自然恢复组，中药胃转安治疗组，西药AZT治疗组四组。实验结束后，采用TRAP-银染法检测各组大鼠胃组织，睾丸和骨髓组织中端粒酶的活性，并相互比较。结果 与其它组比较，自然恢复组大鼠胃组织中端粒酶被激活，p0.05；中药治疗组和西药治疗组大鼠，胃组织中端粒酶活性表达，与正常对照组比较无差异，p0.05；中药治疗组与西药治疗组比较，端粒酶活性表达，无显著性差异，p0.05；自然恢复组、中药治疗组、西药治疗组大鼠，睾丸组织和骨髓组织中端粒酶活性与正常对照组相比，均无显著性差异，p0.05。结论 胃转安方有效抑制胃粘膜异型增生，抑制端粒酶活性，阻止癌前病变向胃癌的转变，且对正常组织中端粒酶活性无影响，提示胃转安方治疗胃癌前病变安全可靠。 关键词：胃转安方；胃癌前病变；端粒酶；安全性 胃转安方是临床治疗慢性萎缩性胃炎胃癌前病变的专方，疗效显著。我们前期的实验已证实，在MNNG攻击制作大鼠胃癌前病变的过程中，大鼠胃组织的端粒酶活性被激活了，并且中药胃转安方能有效地抑制胃癌前病变大鼠胃组织端粒酶的活性[1]。然而，研究表明除恶性肿瘤细胞有端粒酶活性表达外, 正常组织如：生殖细胞、造血干细胞、外周血白细胞、表皮细胞等具有再生能力的细胞也有不同水平的端粒酶活性表达[2], 有报道称端粒酶抑制剂对正常组织中端粒酶的活性无影响，但有学者对此持否定态度，并用实验证实了自己的观点[3]。 此研究将观察胃转安方对胃癌前病变大鼠胃组织端粒酶活性的抑制作用的实验，能否被重复，胃转安方对胃癌前病变大鼠睾丸组织和骨髓组织中端粒酶活性是否有影响。从而探讨中药治疗胃癌前期病变可能的作用机理以及在长期服药过程中可能出现的不良反应。 1实验材料 1.1实验动物 SPF级Wistar大鼠70只，雄性，体重在80-100克，由北京维通利华公司提供。合格证号：0078597。 1.2试剂 N-甲基-N硝基-N亚硝基胍（MNNG），日本东京化成工业株氏会社；胃转安方药膏（方由黄芪，虎杖，莪术，红大戟，半枝莲，山慈姑，甘草等组成）由天津市中医药研究院附属医院提供；叠氮胸苷（齐多夫定片，AZT），东北制药总厂；TRAP-银染法端粒酶活性检测试剂盒，购自南京凯基生物科技发展有限公司；考马斯亮蓝G -250，美国 Sigma 公司；内标引物，分子量为307bp，序列为：上游引物 5’-CCCAA TCCGT CGAGC AGAGT TTGCC TTACT GGTTA GC，下游引物 5’-GCCGA CCCTA ACCCT AACCC TAACG GACCA GAGAA AAATC AC ；由天津灏洋生物公司设计。 所用仪器 光学显微镜，Olympus CX 31型，日本；紫外可见分光光度计，754型，上海光谱仪器有限公司产品；PCR扩增仪，TC-96/T/H（a），杭州博日科技有限公司；台式离心机，TGL -16B，上海安亭科学仪器厂；电泳仪，DYY-7C，北京市六一仪器厂。 2动物造模 将70只大鼠适应性喂养一周后，根据体重随机抽取12只作为正常对照组，剩余58只鼠进行造模。动物造模方法参照王少明等[4]造模方法，将MNNG 配制成1g/L的母液，4。C避光保存，每周配制一次，使用时将其稀释成100ug/ml的溶液，加入到涂有黑漆的瓶子里让造模组大鼠自由饮用，同时喂食含有0.03%的雷尼替丁，并采用饥饱失常喂养法，即进食2天，禁食1天，禁食当天下午用40%的乙醇灌胃，2ml/只，乙醇灌胃共10周 。26周、30周时分别随机处死正常组鼠1只和造模组鼠3只，做病理组织学检查，HE 染色，光学显微镜下观察鼠胃粘膜的变化，以确认模型是否成功。正常组普通喂养。 造模过程中大鼠死亡9只，30周造模成功后，将造模组大鼠按体重随机分为自然恢复组11只，中药治疗组16只，西药治疗组16只。自然恢复组普通喂养，中药组大鼠喂食加有胃转安药膏的饲料（按每只大鼠每日相当于成人体重给药量的20 倍计算，将中药药膏掺入饲料），西药治