臭氧及相關技术在口腔诊疗污染控制中的应用.docVIP

臭氧对口腔诊疗中可能的病毒杀灭作用研究 目的：针对牙科治疗中不可避免的回吸效应所带来的乙型肝炎病毒 交互感染问题，利用臭氧水动态、适时对牙科治疗台水系统进行消毒，使其菌丛含量达到美国牙科协会（ADA）的理想标准[1]，实现了口腔治疗用水的适时无菌化。方法：对20例已知的乙肝“大三阳”患者进行开髓等常规治疗操作结束后卸下手机，从手机连接管口接取水样、送检；将东线公司的动态水灭菌系统与牙科治疗台水系统结合，系统采取循环方式供水，使牙科治疗台管道内臭氧水的臭氧浓度保持在特定的浓度；并检测该浓度臭氧水对脊髓灰质炎病毒的杀灭效果。结果：实施水消毒前，手机连接管出水口水样PCR检测结果乙肝病毒DNA阳性7例；臭氧水与病毒作用30s，对病毒的杀灭率100%；臭氧水与正常细胞接触24h，正常细胞的生长未受到影响。结论：本方法是牙科治疗台水系统的高效消毒手段，是杜绝口腔科乙肝患者交互感染的切实可行的方法。未经消毒的牙钻是传播乙型肝炎等疾病的媒介[1]，这一点已成为人们的共识。在临床工作中牙钻手机与牙科治疗台水系统的手机连接管衔接，手机的回吸作用可以将患者口腔内的污染液体回吸入手机，并穿过手机内的中空管道进入手机连接管并污染治疗台水系统[2、3]。回吸是不可避免的物理现象，使用防回吸手机等措施，都不能取得满意的效果。因此，即便对牙钻手机实行了有效消毒灭菌之后，由于治疗台水系统的污染，牙钻作为媒介导致的医院内感染问题并未完全解决。现将解决本问题的方法报告如下。1.资料与方法1.1?? 临床资料?? PE5700型荧光定量PCR仪（美国Perkin elemer公司），96孔微量细胞培养板（丹麦NUNC公司生产），乙型肝炎（HBV）荧光定量试剂盒（中山大学达按基因股份有限公司提供），脊髓灰质炎口服糖丸（北京天坛生物制品股份有限公司生产），Hep-2细胞（天津医科大学微生物教研室提供），1640细胞培养液（美国SIGMA公司生产），小牛血清（天津医科大学微生物教研室提供）。??? 收集2003年2月~2003年7月在消化科和市传染病医院诊断的乙型肝炎HbsAg、HBeAg、HbcAb阳性患者，从中选择牙病牙痛患者20例，其中男14例，女6例，年龄24~43岁，平均29岁。1.2?? 方法1.2.1 牙科治疗台水系统乙型肝炎病毒污染水样的采集??? 为每一患者配置一台口腔综合治疗台取样专用。排空治疗台内存水，拆下储水罐，15%过氧乙酸浸泡、清洗，生理盐水冲洗，重新安装到牙科治疗台并注入清洁的蒸馏水。拆下原来的手机连接管，用新的连接管替换。储水罐加入蒸馏水1.0L，启动脚踏开关，从手机连接管口排水3min，安放经合格灭菌的高速涡轮手机，为乙型肝炎患者进行常规治疗。??? 用牙钻手机对该组患者进行开髓、备洞等常规治疗操作，操作结束后卸下手机，用无菌试管对准手机连接管口，启动机器，接取排出液体1-2ml，密封，送检。每次治疗取样结束后，卸下高速牙钻手机，排除手机管路内储水，用上述方法清洗、消毒储水罐，更换新的手机连接管，安装无菌手机，启动机器，排水3min，再为下一乙肝患者治疗取样。1.2.2? 乙型肝炎病毒的检测：??? 取上述方法采集的水样40μl，加等量DNA提取液打匀，沸水浴10min，转至4℃静置8~12h。10,000rpm离心5min，取上清液5μl做PCR反应。反应循环参数：93℃2min。预变性：93℃45sec，55℃1min，反应10个循环，93℃30sec，55℃45sec，反应30个循环。结果分析：依据已知标准样品起始模板的对数值与Ct值的模板存在时，即得到反应核酸扩增的过程的S形动力学曲线。1.2.3.对脊髓灰质炎病毒杀灭效果的实验室检测方法??? 根据卫生部最新颁布的《消毒技术规范》[4]，本项目用臭氧水对脊髓灰质炎病毒标样进行实验室杀灭实验替代对乙型肝炎病毒的杀灭实验。将含脊髓灰质炎病毒（V1-3型）的糖丸用1ml冷的灭菌蒸馏水稀释，取0.1ml接种于长成单层的Hep-2细胞上，病变达“+++”到“++++”时收获，然后连续传代2次，获得一定浓度的病毒悬液，用MTT法检测病毒悬液的滴度（TCID），并用1640培养基将病毒悬液稀释到TCID为102/ml时待用，将稀释后的病毒悬液和特定臭氧水1：1混合，作用不同时间（30s、60s、120s、180s），然后接种于细胞（Hep-2）长成单层的96孔板上，同时设细胞对照、细胞与臭氧水混合的对照及阳性对照，按细胞培养方法培养后，在显微镜下观察细胞形态，同时检测0.D值，以此来确定对病毒的杀灭效果。2.结果2.1? 对20例乙型肝炎患者的患牙治疗后，手机连接管出水口水样PCR检测结果，7例阳性（见表1）。 2.2适当浓度臭氧水对脊髓灰质炎病毒杀灭效果的实验室检测