花粉的抗氧化性的研究-西北大學.docVIP

PAGE PAGE 6 西北大学学报(自然科学网络版) 2004年10月，第2卷，第10期 Science Journal of Northwest 收稿日期：2004-05-31 基金项目：陕西省教育厅专项科研计划资助项目（03JK111）;陕西省博士后科研经费基金资助项目（BX03003） 审稿人：田呈瑞，男，陕西师范大学食品工程系教授，博士生导师。 蜂花粉提取物抗氧化作用的研究 厉 阗，曹 炜，宋纪蓉 （西北大学 化工学院，陕西 西安，710069） 摘要：为进一步开发利用蜂花粉资源，研究5种蜂花粉活性成分的抗氧化性。采用超声法，以甲醇为溶剂提取5种蜂花粉活性成分；测定提取的5种蜂花粉活性成分对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除率和脂质过氧化的抑制率。结果表明：5种蜂花粉均具有较强的抗氧化作用，其中荞麦花粉甲醇提取物对超氧阴离子的清除作用和脂质过氧化的抑制能力最强；油菜花粉甲醇提取物对羟基自由基和二苯代苦味酰（DPPH）自由基的清除能力最强。认为蜂花粉是一种有前途的天然抗氧化剂。 关键词：蜂花粉；抗氧化作用；甲醇提取物 中图分类号：Q5　 文献标识码：A 文章编号：1000-274X(2004)0089-06 生物体系中存在着大量的脂质氧化和自由基反应。现代医学研究证明，衰老、癌症及炎症等疾病与体内脂质过氧化和自由基有着直接的关系[1 ]。自由基会使体内的脂质和蛋白质发生链式反应，造成相关细胞结构与功能的破坏，其氧化产物和中间产物也会导致生物膜、酶、组织、基因等损伤，使人体发生病变。在抗氧化酶与内源抗氧化剂的合成量降低的情况下，如果不及时从体外补充外源性抗氧化剂以提高机体抗氧化能力，人体就会加速衰老、易患疾病。天然抗氧化剂有抑制体内脂质过氧化和氧自由基的作用，同时可促进体内抗氧化酶与内源性抗氧化剂的合成。因此，对清除自由基和抑制脂质过氧化作用的天然抗氧化剂研究，己得到普遍关注[2]。 花粉是植物的雄性生殖细胞，它存在于雄蕊的花药之中。蜂花粉是蜜蜂采集花粉后用自己的唾液和花蜜粘合形成的颗粒，比单一花粉更有营养价值[3]。蜂花粉中含有黄酮类、维生素、激素、核酸、酶类和微量元素，具有特有的抗衰老作用，是良好的抗氧化食品。蜂花粉的种类不同，所含成分有很大区别，因此研究不同种类蜂花粉的抗氧化作用具有重要的价值。本文研究蜂花粉甲醇提取物对超氧阴离子、羟基自由基、DPPH自由基的清除与脂质过氧化的抑制作用，通过对比不同蜂花粉对氧自由基的清除率和脂质过氧化的抑制作用，为开发利用蜂花粉资源提供依据。 1 材料与方法 1.1 材 料 1.1.1 样品与试剂 油菜蜂花粉、荞麦蜂花粉、茶叶蜂花粉、芝麻蜂花粉、益母草蜂花粉由陕西老蜂农蜂业有限责任公司提供；二苯代苦味酰自由基( DPPH)为 Sigma公司产品，分析纯；甲醇、硫代巴比妥酸（TBA）等均为国产分析纯试剂。 1.1.2 仪 器 UV-751型紫外可见分光光度计，上海分析仪器总厂；KQ-250DB型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。 1.2 方 法 1.2.1 蜂花粉活性成分的超声萃取 称取干燥后的5种蜂花粉各2 g，分别用30 mL甲醇在常温下超声提取30 min，过滤后，滤渣再提取一次，合并滤液，弃去滤渣。将所得滤液用旋转蒸发器浓缩，加甲醇定容至10 mL备用。 1.2.2 蜂花粉甲醇提取物的抗氧化作用的测定 1）蜂花粉对超氧阴离子自由基的清除作用。采用邻苯三酚自氧化速率测定法，25℃下，在4.5 mL K2HPO4-KH2PO4缓冲液(pH 8.30)中加入7.5 μL用10 mmol/L HCl配成的50 mmo1/L邻苯三酚溶液，迅速混匀，倒入光径１cm的石英比色杯内，在325 nm波长光线下，每隔30 s测吸光值（A）一次。提取物对碱性邻苯三酚体系产生的超氧阴离子自由基的清除作用按文献[4]的方法进行。 抑制率=[(△A自氧化–△A样品)/ △A自氧化] ×100% 式中：△A自氧化 为自氧化对照值，△A样品 为 样品值。 2）蜂花粉对羟基自由基的清除作用[5，6]。在10 mL硬质试管中，依次加入KH2PO4-K2HPO4(PH7.4)缓冲液0.4 mL，一定量的样品液（1.04 mmol/L EDTA-1mmol/L FeSO4-1 mmol/L Vc 0.1 mL），12 mmol/L H2O2 0.1 mL，60 mmol/L脱氧核糖(DR)0.05 mL，定容为1.0 mL。然后，将试管置于37℃的恒温水浴锅中保持1 h，取出，迅速添加1 mL