感受态细的制备质粒DNA的转化和提取.doc

感受态细胞的制备 —LB液体培养基：胰蛋白胨，1%（W/V）；酵母提取物，0.5%（W/V）；NaCl，1%（W/V），用固体NaOH调节pH为7.0~7.2，分装于三角瓶中，灭菌后存于室温。摇动三角瓶，如果发现变浑浊，表明已染菌，应弃掉重新配制； —0.1 mol/L CaCl2：称取1.47 g CaCl2?2H20（Amresco分装）溶于100 mL去离子水中，灭菌后存于4℃； —离心管（50 mL或80 mL或100 mL），灭菌； —培养试管，灭菌； —1 mL枪头，灭菌； —1 mL加样枪； —滤纸，用牛皮纸包好后灭菌； —10 mL量筒，灭菌； —5 mL移液管，用棉花塞入管口，卷于报纸中灭菌； —冰，离心管架； —恒温摇床，可见分光光度计，玻璃比色杯。 1．接种空白大肠杆菌于3 mL LB培养基中，37℃剧烈震荡培养过夜； 2．将已培养好的种子液转入100 mL LB培养基中扩大培养至OD650=0.3后，将培养好的细菌置于冰上冷却10 min； 3．4℃，4 000 rpm离心10 min收集细菌，倒出上清，将离心管倒置于一干净滤纸上，将培养基控干； 4．用40 mL冰预冷的CaCl2悬浮细菌，用加样枪冲吸，使菌体尽可能分散。冰上放置30 min； 5．4℃，4 000 rpm离心10 min收集细菌，倒出上清，再用4 mL冰预冷的CaCl2悬浮细菌，这