感受态细的制备和质粒的转化实验.docx

生物工程大实验 学 院： 生命科学学院 专 业： 10级生物工程 班 级： 三班 姓 名： 林冬 学 号： 1009030302 指导教师： 肖露老师 感受态细胞的制备和质粒的转化实验实验目的：1.掌握用CaCl2法制备感受态细胞的原理和方法。2.学习和掌握质粒DNA的转化和重组质粒的筛选方法。实验原理：细菌吸收外源DNA 的能力最高时的状态被称为感受态细胞。有些种类的细菌在其生长的任一阶段都处于感受态，而另一些细菌只有处于某个生长时期时（一般为对数生长早、中期），才会处于感受态，如本实验所用的大肠杆菌。用一定浓度的CaCl2 处理对数生长早中期的细菌可以大大提高细菌吸收周围环境中的DNA分子的能力。对这种现象的一种解释是 CaCl2能使细菌细胞壁的通透性增强，从而提高转化率。这种转化方法称为“化学法”。材料：设备与试剂实验方法：取100mlDH5ɑ培养物置于冰浴中10min，同时将0.1m Cacl2和灭菌的50ml离心管4℃中放置10min.在无菌条件下将培养物移入50ml离心管中（不能超过2/3体积约30ml）平衡后对称放入离心机，在4℃，6000转/min,离心5min,停止离心后，弃上清液（在超净工作上无菌条件下操作）加入5ml预冷的0.1molCacl2溶液，用涡旋振荡器振荡均匀使DH5ɑ细胞重新悬浮，置于冰水浴中旋