抗P激活磷酸化蛋白激酶多克隆抗体的制备及其在牙胚细胞研究中的应用.doc

抗P-21激活的磷酸化蛋白激酶5多克隆抗体的制备及其在牙胚细胞研究中的应用 作者：安政雯1,2；刘宏伟1,3；贾志敏4；李照峰1；Staffan Str觟mblad2；张宏权2　　(南方医科大学1南方医院口腔科，4药学院，广东 广州510515；2Karolinska Institute Department of Biosciences and Nutrition, Sweden Huddinge SE-141 57；3同济大学附属口腔医学院，上海??200072) 摘要：目的??克隆PAK5-N 端基因并诱导其表达，进行多克隆抗体制备，为研究其在牙胚细胞中的生物学功能奠定基础。方法??根据人全长PAK5 cDNA序列，设计引物；利用PCR技术，以PAK5 全长cDNA为模板扩增PAK5-N端基因，将扩增产物克隆至pGEX-4T-1载体中，经EcoRI /XhoI 双酶切后进行重组质粒鉴定，DNA测序。以硫代半乳糖苷诱导其在大肠杆菌BL21中表达。利用GST融合蛋白纯化系统进行蛋白纯化，通过免疫家兔制备多克隆抗体，并在牙胚细胞中进行了初步研究。结果和结论??成功克隆了PAK5-N端基因，在E.coli中表达了PAK5-NT，并纯化了GST融合蛋白，制备了PAK5特异性抗体。Western blotting 表明PAK5 在牙胚细胞中过度表达，为其在口腔细胞中的生物学功能研究提供