第八章基工程和基因组学.ppt

谢爱林 目的基因与载体连接(DNA分子重组) 目的基因导入受体 五 基因工程的应用 (一)基因工程工业 ◆在动物体内胰岛素是胰腺细胞先形成一种前体胰岛素，再加工成两条不同的成熟胰岛素原分子，A链含21个氨基酸残基，B链含30个氨基酸残基，经两对二硫键连接形成成熟的胰岛素。 (二)植物基因工程 1. 根癌农杆菌介导的植物转化 ◆植物基因转化是指将外源基因转移到植物细胞内、并整合到植物基因组中稳定遗传和表达的过程。 ◆根癌农杆菌介导的植物转化 ◆除草剂glyphosate，是通过抑制叶绿体中的EPSP合成酶而杀死杂草的。如果EPSP合成酶遭到glyphosate的破坏，会使一些关键氨基酸的合成受阻，导致植物枯萎、死亡 ◆利用从抗glyphosate的大肠杆菌中分离、克隆的EPSP合成酶基因，已培育出高抗除草剂glyphosate转基因植物。 2. 基因枪转化技术 ◆通过高压气体等动力，高速发射包裹有重组DNA的金属颗粒，将目的基因直接导入受体细胞，并整合到染色体上的方法。 ◆这种转化方法已广泛用于转化水稻、小麦、玉米、大豆等主要作物。基因枪技术还用于转化微生物、动物细胞、动植物器官、细胞器和正在生长的植物。另外，基因枪在多基因共转化中更表现出极大的优越性。 (三) 转基因动物 与转基因植物相比，转基因动物的发展要慢一些。 ◆例如，利用转基因羊大量表达人类的抗胰蛋白酶。人类抗胰蛋白酶基因缺失导致的肺气肿，属于一种先天性遗传疾病。 ◆将人的抗胰蛋白酶α-1基因克隆在羊奶产生相关基因启动子的下游，这种启动子仅在乳腺细胞中表达。将这个嵌合基因注射到已授精的羊的合子中，再放植到母羊体内，产下的转基因羊发育正常。交配后产生的羊奶中含有大量有功能的人类抗胰蛋白酶(每升35克)，这一结果说明可利用家禽作为生物反应器，生产人类大量需要的重要蛋白质。 (四) 遗传疾病诊断 RFLP 法 RFLP 法 (四) 遗传疾病诊断 2. 等位基因特异寡核苷酸法 (五) 基因治疗 ◆利用基因工程技术，将特异基因导入并整合到具有遗传缺陷的患者的基因组中，以治疗遗传疾病的方法，通常叫做基因治疗(gene therapy)。 ◆目前已有几种基因治疗方法。其中最常用的基因转移治疗方法是利用减毒的病毒DNA(retro virus DNA)作载体，构建重组DNA分子，用病毒包装物包装后形成的重组减毒病毒感染患者的细胞，将正常基因整合到染色体上。 (六) DNA芯片 ◆ DNA芯片技术是在面积不大(如2平方厘米)的基片表面分成不同小格，有序地点阵排列一系列固定于一定位置的、可寻址的核苷酸分子，再将待分析的核苷酸分子标记(如用荧光)，变性成单链后与芯片进行分子杂交，与芯片上序列相同的核苷酸将与其杂交，与芯片上序列不同的序列就会被洗掉，然后用高精度的激光扫描仪记录分子杂交的荧光信号，通过计算机软件分析、综合成可读的信息。因此，DNA芯片分析同核酸分子杂交一样，得到的信息是核苷酸水平的遗传变异资料。Chip.ppt 第二节 基因组学 概述 基因组图谱的构建 基因组图谱的应用 后基因组学 * 第八章 基因工程和基因组学 第一节 基因工程 第二节 基因组学 第一节 基因工程 基因工程概述 限制性内切核酸酶 载体 基因的分离与鉴定 基因工程的应用 基因工程概述 ★遗传工程一般可分为广义和狭义的两种。广义的遗传工程包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程等。狭义的遗传工程即是通常讲的基因工程。本节只介绍基因工程。 ★基因工程中的DNA重组主要是指创造自然界中没有的DNA分子的新组合。这种重组不同于经典遗传学中经过遗传交换产生的重组。基因工程是采用分子生物学、核酸生物化学以及微生物遗传学的现代方法和手段建立起来的基因操作技术。 ★从细胞和组织中分离DNA。 ★利用能识别特异DNA序列的限制性内切核酸酶(restriction endonucleases)酶切DNA分子，制备DNA片段。 ★将酶切的DNA片段与载体DNA连接，构建重组DNA分子。 ★将载体与DNA片段构成的重组DNA分子导入宿主细胞后，该重组DNA分子能在细胞内复制，产生多个完全相同的拷贝，即克隆(clones)。 ★重组DNA能随宿主细胞的分裂而分配到子细胞，使子代群体细胞均具有重组DNA分子的拷贝。 ★能从宿主细胞中回收、纯化和分析克隆的重组DNA分子。 ★克隆的DNA能转录成mRNA、翻译成蛋白质。能分离、鉴定基因产物。 一 基因工程概述 目的基因的获得 目的基因与载体的连接成重组DNA分子 重组DNA分子导入受体细胞 筛选重组克隆 基因表达与产物分离 基因工程的内容 一 基因工程概述 重 组 DNA  技 术