western blotting的试剂选择.pptxVIP

Western Blotting林佳爱拼课题组目录WB问题分析蛋白样本的制备WB过程试剂的选择蛋白免疫印迹杂交（Western Blot ,WB） 通是过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白根据分子量大小分开，然后转移到固相载体（杂交膜）上，最后通过抗原抗体反应检测杂交膜上的靶蛋白是否存在，从而检测到靶蛋白在待测标本中的表达情况。细胞组织蛋白提取蛋白抽提试剂、蛋白酶抑制剂的选择蛋白定量、煮沸处理蛋白MAKER的选择凝胶浓度的选择电泳液配方的选择上样、电泳膜的选择，膜孔径的选择转膜液配方的选择0.22微米 0.45微米考马斯亮蓝染色、丽春红染色信号增强剂转膜封闭封闭液的选择洗膜一抗孵育一抗二抗稀释液的选择内参的选择洗膜二抗孵育洗膜HRP预混底物、DAB显色液、TMB底物溶液、其它显色试剂盒的选择底物孵育曝光或显色一抗二抗清除剂一、蛋白样本的制备蛋白提取的质量直接决定着WB结果的好坏，因此，根据标本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的！NP-40 (全细胞,细胞膜)RIPA (全细胞,细胞核,细胞膜,线粒体)Tris-HCl (可溶性细胞质) Tris-Triton (细胞质-细胞骨架)RIPA NP-40 Tris-HClTris-Triton裂解液的选择胞浆蛋白核蛋白跨膜蛋白线粒体蛋白磷酸化蛋白BCA法Bradford?法Lorry?法蛋白定量蛋白酶抑制剂的选择单一的蛋白酶抑制剂