第十三章可见分光光度法和紫外分光光度法简介素材.ppt

此法的特点： ①灵敏度高------10-4 mol/L ~10-6 mol/L ②相对误差小------2%~5% ③应用广泛-----医药、卫生、环保、化工 四、Lambert- Beer 定律 溶液对光的吸收除与溶液本性有关外，还与入射光波长、溶液浓度、液层厚度及温度等因素有关。 A=kbc b为液层厚度，通常以cm为单位 k称为吸收系数(absorptivity)，其数值的大小，与物质的性质、入射光波长、溶剂种类及溶液温度等因素有关。当波长等其他因素一定时，只与物质的性质有关。 A=kbc 1、在一定条件下，溶液的吸光度与溶液的组成标度及液层厚度的乘积成正比。 2、此定律是光度法定量分析的基础，不仅适用于可见光，也适用于紫外光和红外光。 紫外-可见分光光度计的类型 单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。 1、单光束分光光度计：经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定 ； 2、双光束分光光度计：单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，另一束通过样品池。 优点：能自动消除光源强度变化所引起的误差 双波长分光光度计 优点：对于多组分混合物、浑浊试样（如生物组织液等存在背景干扰或共存组分吸收干扰）分析，能提高方法的灵敏度和选择性。 （二）偏离朗伯－比尔定律引起的误差 1、物理因素：单色光纯度差、杂散光、散射光、反射光、非平行光等导致偏离朗伯－比尔定律 ，产生误差。 2、化学因素（1）溶液浓度过高引起的偏离 （2）化学反应引起的偏离 3、 显色条件的选择-----选择合适的显色剂 4、溶液的酸度 由实验A-pH测定 HL ? H+ + L- Mn+ + nL- ? MLn(有色物) 显色剂多为有机弱酸，酸度愈低，愈有利于显色反应的进行，使有色物浓度增大，但酸度过低会形成金属氢氧化物沉淀。 4. 参比溶液的选择 为了消除外界对测量的影响(溶剂或其他有色物质对入射光的吸收、光在溶液中的散射以及比色皿界面对光的反射等) ，需要用空白溶液（参比溶液）作对照，测定时，首先将空白溶液置于光路，调节仪器的“Zero”键，使A=0或T=100%，然后开始测定标准溶液或被测液的A。常用空白溶液有： 溶剂空白 试液、试剂、显色剂均无色 试剂空白 试样无色、试剂或显色剂有色 试样空白 试样有色、试剂和显色剂均无色 例如：测定湖水中的Fe3+浓度，蒸馏水、邻二氮菲 * 第十三章 紫外-可见分光光度法 （Vis-UV Spectrophotometry） 一、分光光度法基本原理 二、紫外-可见分光光度计 三、提高测量灵敏度和准确度的方法 ★ ★ ★ 本章目的要求 掌握内容 1. Lambert-Beer定律及其应用 2. 摩尔吸光系数 3. 吸收光谱 熟悉内容 1. 单色光和互补色光 2. 分光光度法的测定方法 了解内容 1. 紫外-可见分光光度计 2. 条件的选择 概念： 分光光度法是根据物质的吸收光谱及光的吸收定律，对物质进行定性、定量分析的一种分析方法。 分类： 可见分光光度法 (400~760 nm) 紫外分光光度法 (10~400 nm) 红外分光光度法 (760~3×105 nm) §1 分光光度法基本原理 一、物质对光的选择性吸收 1、当一束光照射到某物质或溶液时，组成该物质的粒子会与光子作用，光子的能量转移到粒子上，使粒子由低能量的基态转为激发态，而产生吸收谱线。 M基态 + h v → M*激发态 ①、粒子对光子能量的吸收是有条件的，只有h v =△E才会被粒子吸收。 h v---光子的能量；△E---被照射粒子基态与激发态的能量差 ②、不同物质的△E不同，所以它对光子的吸收具有选择性，会吸收不同波长的光。 若某物质对各种色光均不吸收，则呈现 ； 若全部吸收则呈 ； 若吸收蓝色光则呈现 。 2、单色光、复色光、互补色光 单色光：具有单一波长的光叫单色光，如红光，蓝光等复色光：由不同波长的光组成的光叫复色光，如日光等 互补色光：如果两种适当颜色的单色光按适当的强度比例混合能得到白光，则这两种颜色的光叫做互补色光。 无色透明色 黑色 黄色 为了研究溶液对不同波长的光的吸收情况，将不同波长的单色光依次通过一固定浓度的有色溶液，测量该溶液对不同波长的单色光