大学毕业设计-基因在人胃癌组织和细胞株中的表达及其意义.docVIP

摘要: 目的：本实验采用实时荧光定量PCR、Western Blot法以及免疫组化SP法分别检测fascin1在胃癌细胞及胃癌组织中的表达，进一步分析fascin1的表达水平和胃癌患者临床病理参数的相关性，旨在探讨其与胃癌发生、发展及预后的关系，为胃癌的基因治疗提供参考数据。 方法：本实验由两部分组成：①将正常胃粘膜上皮细胞株GES-1，不同分化胃癌细胞株MKN28、SGC-7901、MKN45分别种到25cm2培养瓶，待细胞长到80%-90%融合时，选择生长状态良好的细胞进行RNA和蛋白质的提取后，采用RT-qPCR检测以上四种细胞fascin1 mRNA的表达水平;Western Blot法检测以上四种细胞中fascin1蛋白的表达水平。②采用免疫组化SP法检测fascin1在80例胃癌组织标本中的表达水平，同时取距离肿瘤组织5cm的癌旁正常胃粘膜20例作为正常对照，并结合患者的临床病理参数统计分析这些参数与fascin1之间可能的关系。 结果：（1）实验中提取的细胞RNA和蛋白质经过质量测定，均符合实验要求。（2）实时荧光定量PCR和Western blot分析法结果显示：正常胃粘膜细胞及不同分化胃癌细胞株均有fascin1mRNA和fascin1蛋白的表达；三组胃癌细胞的fascin1mRNA和fascin1蛋白的相对表达量较正常胃粘膜细胞分别具有差异性，且差异具有统计学意义（P0.05）；而在胃癌细胞中fascin1 mRNA和fascin1蛋白的表达水平，随着细胞分化程度的降低，逐渐的上调。(3)免疫组化显示fascin1阳性表达主要位于胃癌细胞的胞浆和胞膜，胃癌间质中的血管内皮细胞亦可见 fascin-1阳性染色；在癌旁组织中,可见血管内皮细胞及淋巴组织的树突状细胞中均呈阳性表达。fascin1在80例胃癌中的48例呈不同程度的阳性表达，占58.75%，其中22例为（++-+++），占27.5%，其中在20例癌旁5cm以上正常胃粘膜中有3例fascin-1弱阳性（+），而此20例标本相应的胃癌组织中fascin1均有表达。比较fascin1在胃癌组织和癌旁正常胃粘膜标本中的表达水平发现二者差异具有显著性（P＜0.05）。进一步分析胃癌中fascin1的表达及其与临床病理相关指标的关系发现，fascin1在未-低分化组的阳性表达率和表达强度高于高、中分化组，在肿瘤的直径5cm标本中fascin1的表达高于直径≤5cm者（P＜0.05），在胃癌伴远处转移的病例fascin1的表达率相对较高，且fascin1的表达水平与胃癌的TNM分期相关，胃癌患者的TNM分期越晚，fascin1表达越高（P＜0.05），fascin1的表达仅与胃癌组织的分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移远处转移和TNM分期有关，而与肿瘤位置、年龄、性别没有显著相关性。 结论：本研究发现fascin1的表达与胃癌的分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关，与患者年龄、性别没有相关性。以上结论说明fascin1在胃癌浸润和恶性转移中可能起一定的病理作用，为胃癌的基因治疗提供参考数据，针对fascin1的靶向治疗可能使化疗耐药、fascin1阳性患者好得较好的疗效。 符号说明 英文缩写 英文全称 中文名称 cDNA complementary DNA 互补脱氧核糖核酸 mRNA messenger RNA 信使RNA miRNA microRNA 微小RNA fascin-1 fascin actin-bundling protein 1 肌成束蛋白1 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 RT-qPCR Real-time Quantitative PCR 实时荧光定量PCR RT reverse transeription 逆转录 SPSS Statistical Package for Social Statistics 社会科学统计软件包 EP Eppendorf tube Eppendorf 离心管 RT reverse transeription 逆转录 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 DEPC diethyl pyrocarbonate 二乙基焦磷酸盐 SDS sodium dodecyl sulfate polyacrylamide