7第七章_细菌的遗传分析.pptVIP

⑴ F 因子：致育因子（ fertility factor ）或称性因子 （ sex factor ），是一种附加体。 携带F因子的菌株称为供体菌或雄性，用F＋表示。 未携带F因子的菌株为受体菌或雌性，用F－表示。 （二）F因子及其转移 ⑵ F 因子的结构 染色体外遗传物质（质粒），环状DNA，9×104 bp，大约为大肠杆菌环状染色体的2%，具有40-60个蛋白质基因。 F因子分为三个区域： 重组区：有4个插入顺序（insertion sequence, IS），通过和宿主染色体 上的IS同源重组或通过转座，F因子可以整合到宿主不同位点上。 自主复制区：有转移的起点和2个复制起点。复制起点Ori T是在染色体转移时进行滚环复制时的复制起点；Ori V是在营养时期，即游离在细胞质中独立复制时的复制起点。 转移区：主要有合成性伞毛即F纤毛（F pili）的操纵子。F纤毛是由性 伞毛蛋白构成，呈管状，又叫接合管。通过接合管可将供体和受体细胞相联。共30kb长，有40个基因与DNA的转移有关。 ⑶ F 因子的三种状态 ②有一个自主状态的F因子，即F＋细胞； ③带有一个整合的F因子的品系叫高频重组，Hfr细胞。 ① 没有F因子，即F－细胞； F＋与F－菌 （1）有F因子的细菌称为F＋，细菌增殖时可把F 因子传递给后代细胞（通过自主复制）。 （2）没有F因子的细菌称为F－，F＋细菌经吖啶 橙处理而丢失，成为F－。F因子一经丢失， 细胞中便不再出现； （3）F＋可以和F－杂交，而不能和F＋杂交； （4）F＋菌与F－菌混合（即F＋×F－）1小时后，约95%的F－菌转变为F＋菌，而原来的F＋仍然保留有F因子。且可以10－7频率获得重组体后代。 (1) F纤毛（性伞毛）合成：由性伞毛蛋白构成，接合管使供体和受体细胞接触。 (2) 转移启动：F因子从转移复制起点(Ori T)开始向F －转移（ 5’端首先进入受体）。 (3) 单链转移，滚环复制。 F纤毛与接合管 F＋×F－ （三）高频重组(High frequency recombination, Hfr) 1951年Cavalli发现：用氮芥处理F＋, 然后将处理后的F＋与F－杂交，产生高频率的重组子（10－4）。 1954年 Hayes 也分离了Hfr品系，发现： (1) Hfr使重组能力增强，但无传递F因子的能力，Hfr ×F － 时，F －菌很少变成F＋菌。 (2) Hfr只能将供体基因组的一部分传给受体。 Hayes的解释：Hfr的F因子发生了永久性改变。 Hfr 是F因子整合到E.coli 染色体上的结果 E.coli染色体上有20个以上的整合位点； 整合通过IS3等同源重组或转座实现； F因子有多个整合位点，主要在IS3处。 （1）滚环复制；（2）随机中断；（3）F因子的致育区（转移区）在最末端，因而很难转移到F－ 。 部分二倍体中的交换: 单数交换：打开环状染色体，产生一个线性染色体，这种细胞是不能成活的。 偶数交换：产生可遗传的重组体（重组子）和片段。 部分二倍体：当F＋或Hfr的细菌染色体进入F－后，在一个短时期内，F－细胞内的某些位点就会成为二倍体的DNA。这种二倍体是供体的部分基因组（外基因子）与受体的完整的基因组（内基因子）构成，故称部分二倍体。 细菌重组的特点： 只有偶数交换才有效； 相反的重组子不出现。 细菌的交换过程 第四节 中断杂交与重组作图 50年代，Jacob F.和Wollman E. 设计了中断杂交试验，证明接合时遗传物质从供体细胞向受体细胞的转移是直线式进行。 他们将Hfr菌株与F-菌株混合在一起进行杂交: Hfr菌株：thr+ leu+ strs azir tonr lac+ gal+ F- 菌株： thr- leu- strr azis tons lac- gal- str代表链霉素，s代表敏感性，r代表抗性，+代表原养型，- 代表缺陷型。 一、中断杂交试验原理及作图 每隔一定时间取样，把菌液放在食物搅拌器内搅拌，以中断杂交 经过稀释，接种到含有链霉素的完全培养基上，这样将杀死所有Hfr细胞 对形成菌落的F-细胞用影印培养法测试其基因型，以确定每个基因转移到F-细胞的时间。 Hfr菌株的基因是按一定的线性顺序依次进入F—细胞，即染色体从原点开始以直线方式进入F-细胞的。 ① 8分钟时：thr+进入F-细胞。 　 8.5分钟时：leu+进入F-细胞。 ② 9分钟时：有少量叠氮化物抗性的菌落，少数azir基因进入F-细胞。 ③ 11分钟时：出现抗菌噬体T1的F-细菌。 ④ 18和25分钟时：