微1生物学8.pptVIP

四、生物种系的遗传改良 及疾病的基因治疗和基因药物 1. 基因重组微生物 2. 通过植物转基因改良品种 3. 动物的转基因 4. 基因治疗与基因药物 定义：代谢(途径)工程 is the use of molecular techniques (or recombinant DNA techniques) to improve the efficiency of pathways that synthesize specific products. ----- L M Prescott et al., in MICROBIOLOGY, 5th ed 1. 基因重组微生物 Zymomonas mobilis 的乙醇发酵途径 Entner-Doudoroff pathway 丙酮酸 乙醛 + CO2 乙醇 乙醇脱氢酶 丙酮酸脱羧酶 E. coli 的部分代谢途径 EMP途径 乳酸 丙酮酸 甲酸 CO2+H2 乙酰辅酶A 磷酸转移酶 乙醛脱氢酶 乙酰磷酸 乙醛 乙酸激酶 乙醇脱氢酶 乙酸 乙醇 乳酸脱氢酶 E. coli 的代谢工程 EMP途径 乳酸 丙酮酸 乙醛 甲酸 CO2+H2 乙酰辅酶A 乙醇 磷酸转移酶 乙醛脱氢酶 乙酰磷酸 乙醛 乙酸激酶 乙醇脱氢酶 乙酸 乙醇 乳酸脱氢酶 丙酮酸脱羧酶 乙醇操纵子设计 宿主菌株的选择 基因的整合 表达水平的筛选 条件优化等 乙醇脱氢酶 外原基因构建途径 利用木质纤维水解液的乙醇发酵菌株 菌株 产量 得率 速率 （g/l） （%） （g/l /h） Sacharomyces 1400 21.0 98 1.60 Z. mobilis CP4 22.6 88 1.04 E. coli KO11 34.7 80 1.16 代谢工程菌发酵水平比较 2. 通过植物转基因改良品种 农杆菌属细菌生活在土壤中，从伤口侵入植物组织后，将T-DNA 插入植物的染色体，产生激素刺激细胞生长，并指导细胞合成细菌所需要的营养物质。 A. tumefaciens促使细胞过量生长产生大块细胞团，引起冠瘿病；A. rhizogenes侵染植物根部导致异常生长，形成“发根”。 这两个种是植物遗传工程的重要工具。 T-DNA 整合 分泌 细胞分裂素 植物生长素 植物细胞 核孔 VirD2 分泌 冠瘿碱 伤害 分泌 乙酰丁香酮 农杆菌 细胞核 Pi-VirA 诱导vir表达 从Ti质粒中切出T－DNA VirD4 VirD2 VirB 农杆菌和植物的相互作用 用Ti质粒构建的穿梭载体 3. 动物的转基因 最有效方法： 用病毒转染动物或动物胚胎。 主要目的： 用动物表达产生人类特定的组织或器官； 建立人类疾病治疗的动物模型； 昆虫、猪、羊等都能被用来表达人类蛋白。 逆转录蛋白（retrovirus） 单链RNA，侵染哺乳动物； 侵染后，RNA逆转录产生双链DNA； 启动子很强，是基因治疗的理想载体。 杆状病毒（baculovirus） 是双链DNA昆虫病毒，粒子杆状，可以被单独排出胞外，也能在细胞内被包装成多角体，即：许多杆状粒子被包埋在多角蛋白中。 多角蛋白的启动子特别强，可大量表达外源基 因； 昆虫体系能完善翻译后的修饰； 适用于生产动物蛋白。 4. 基因治疗与基因药物 有些疾病的发生是由于染色体中的某一个基因失常，彻底治愈这类疾病的方法是用正常基因来替代缺陷基因。将新基因导入人体，对缺陷基因进行改正或修复，从而对疾病进行治疗的方法称为基因治疗。 基因治疗中通常以逆转录病毒为载体，将新基因直接导入体内的增殖细胞。 反义RNA作为基因药物 有些疾病是由于某一种蛋白的不正常表达所引起，如大多数病毒病、癌症、早老性痴呆等都是由于一些不应有的基因表达所导致的病症。解决这些问题的有效办法是防止相关基因的转录和表达。 反义RNA的碱基序列与