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高效液相色谱法的应用的研究进展 武瑶 (材料工程与科学学院应用化学1202，绵阳 621000) 摘要：综述了高效液相色谱法的原理方法及在各方面的应用，并对它的前景进行了展望。 关键词：高效液相色谱法；应用；研究进展 中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A The Research and Development of HPLC’s Application Yao Wu Applied Chemistry 1202, School of Materials Science and Engineering,Southwest University of Science and Technology,Mian Yang 621000 Abstract: The HPLC was summarized, the various aspects of application was talked about,and its prospect was discussed. Keywords:HPLC; application;Research and Development 高效液相色谱法是色谱法中的一个重要分支，英文名称High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC，又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等[1]。20世纪60年代中期，人们从气相色谱法的高速和高灵敏度得到启发，在经典液相色谱法的基础上，采用高压泵，加快液相色谱法中液体流动相的流动速率，改进固定相，以提高柱效能，采用高灵敏度检测器，从而实现了分析速度快、分离效能高和操作自动化。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等科学领域中重要的分离分析技术。 1 高效液相色谱法的分离原理及应用范围 高效液相色谱法以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。按照固定相的性质不同可以分为以下几种。 1.1液固色谱法 液固色谱法是液相色谱法中最先发张起来的一种分离模式。液固色谱法的流动相为液体，固定相为多孔的固体颗粒物质吸附剂，在其表面具有活性的吸附中心，它是根据物质吸附作用的不同来进行分离的，其作用机制是试样分子与溶剂分子对吸附剂活性表面的竞争吸附。常用的液固色谱固定相是表面多孔和全多孔微粒性硅胶、氧化铝、分子筛（极性）和活性炭（非极性）等，由于硅胶柱具有高的柱效，试样容量大，并具有机械性能好、不溶胀、不与大多数试样发生化学反应等特点，因此是使用最普遍的一种色谱柱。 液固色谱分离法最适宜分离那些溶解在非极性溶剂中、具有中等相对分子质量且为非离子型的试样。能分离多官能团化合物、稳定化合物、异构体等，如胺类、酚、醇、酰胺、增塑剂等，液固色谱不适用于强极性的离子型试样的分离，不适用与分离同系物。 1.2液液色谱法 又称液液分配色谱法，两相都是液体。一个液相作为流动相，另一个液相（及固定液）则涂渍在很细的惰性载体或硅胶上作为固定相，流动相与固定相应互不相溶，两者之间有一个明显的分界面。固定液对被分离组分是一种很好的溶剂，当被分析的试样进入色谱柱后，各组分按照它们各自的分配系数，很快的在两相间达到分配平衡，即液液分配色谱是根据组分在两相中的分配系数不同而进行分离的。 若按照固定相与流动相之间相对极性的不同，液液分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法。正相液液色谱法，固定相的极性大于流动相的极性，它对极性强的组分有较大的保留值，常用于分离强极性化合物，例如胺类、酰胺、醇、酚、生物碱、农药、染料等；反相液液色谱法，固定液的极性小于流动相的极性，它对极性弱的组分有较大的保留值，适用于分离弱极性或非极性的化合物，例如多核芳烃、蒽醌、脂溶性维生素、酚醛树脂、增塑剂等。 1.3 离子交换色谱法 离子交换色谱法是以离子交换树脂为固定相，树脂上具有可以交换的离子基团。当流动相带着组分离解生成的离子通过固定相时，树脂上可交换的离子基团与具有相同电荷的组分离子进行可逆交换，根据组分离子对树脂亲和力不同而得到分离。凡在溶剂中能够解离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。它不仅广泛的应用于有机物质，还广泛用于生物物质的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质、药物及它们的代谢物、维生素的混合物、食品防腐剂、血清的分离等。 1.4 离子对色谱法 离子对色谱法是将一种或多种与溶质分子电荷相反的离子（称为对离子或反离子）加到流动相或固定相中，使其与溶质粒子结合形成离子对化合物，从而控制溶质粒子的保留行为，在色谱分离过程中，流动相中待分离的有机离子与固定相或流动相中带相反电荷