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中药麻黄汤HPLC指纹图谱研究 汇报人:井源博 摘要 目的:建立中药复方麻黄汤的指纹图谱。方法:采用RP-HPLP法,色谱柱为WatersXTerraRP18(3.9 mm×150 mm, 5μm),流动相为乙腈-10 mmol/L碳酸氢铵溶液(用浓氨水调pH至9.5),梯度洗脱,检测波长为215nm;流速0.8 ml/min。结果:以麻黄碱为参照峰,标示出麻黄汤10个共有峰,并说明了其药材归属。结论:该方法具有较好的分离效果和良好的精密度,为麻黄汤制剂的质量控制提供了科学依据。 关键词　麻黄汤;高效液相色谱;指纹图谱 1.目的 麻黄汤为医圣张仲景名方,出自《伤寒论》,全方以麻黄为君,配伍桂枝、杏仁、炙甘草所组成,具有发汗解表、宣肺平喘之功效[1]，主治太阳伤寒表实证、恶寒发热、头痛身痛腰痛、无汗而喘[2]。现代药理及拆方实验研究表明,麻黄汤中麻黄碱和伪麻黄碱的生理活性及药动学不尽相同,且方中桂枝、杏仁、炙甘草对麻黄碱和伪麻黄碱的药动学影响较为显著[3-5]。 2.方法 运用RP-HPLC法,通过建立采用传统方法制备的麻黄汤指纹图谱,为较深入地研究该方有效成分的变化提供分析手段,同时,以期从多药物、多成分的系统化角度实现对麻黄汤及相关制剂的质量控制。 实验部分 2.1 仪器与材料 2.2 色谱条件 2.3 检测波长：215 nm 2.4 对照品溶液的制备 2.5 供试品溶液的制备 2.6　指纹图谱测定的方法学考察 2.6.1 精密度试验:取同一供试品溶液,连续进样5次,测定HPLC色谱图,结果各共有峰相对峰面积的RSD小于1.5%,相对保留时间的RSD小于1.2%,表明仪器精密度良好。 2.6.2　稳定性试验:取同一供试品溶液在室温下保存,分别于0、2、4、8、16、24 h进样,HPLC检测,结果其各共有峰的相对保留时间RSD小于1.8%,相对峰面积RSD小于2.3%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。 2.6.3　重复性试验:取同批药材配制成的全方,按供试品溶液制备方法平行制备5份麻黄汤供试品溶液,测定液相色谱图,结果各共有峰的相对保留时间的RSD小于2.7%,相对峰面积的RSD小于2.8%,表明方法重复性良好。 2.7　麻黄汤指纹图谱的测定及技术参数 2.7.1　样品测定:取10批麻黄汤供试品溶液,分别按2.1项下条件进行HPLC分析,比较各色谱图,有10个峰是10份供试液所共有的,因此确定这10个峰为共有指纹峰(图1)。同时取麻黄汤及单味药材样品,按相同条件进行HPLC分析确定各色谱峰来源。通过对照分析,确定共有峰1、9来源于桂枝;共有峰2、7来源于苦杏仁;共有峰3、4、5来源于麻黄;共有峰6, 8, 10来源于甘草。 2.7.2　参照物的选择:在HPLC图谱中选择峰面积较大,出峰时间适中且稳定的色谱峰作为参照峰,结果19.862 min的色谱峰符合此条件,经对照品对照认定为麻黄碱的吸收峰,故选择麻黄碱作为参照物。 2.7.3　共有峰的相对保留时间相对峰面积指纹图谱相似度计算:选取色谱图中10强峰,由色谱工作站辅助自动进行峰匹配,确定10个共有峰。以麻黄碱色谱峰的保留时间和峰面积积分值为1,各共有峰相对保留时间及相对峰面积的RSD均在3.0%以内;以10个共有峰峰面积的均值作模板,利用“相关系数法”[6]和“夹角余弦法”[7]计算指纹图谱的相似度,结果见表1和表2,两种方法计算的相似度结果均在0.99以上。 3.结论 3.1 本研究建立了麻黄汤的RP-HPLC指纹图谱,确定了10个共有峰,结果表明所建立的指纹图谱的技术指标稳定、重现性好。本实验方法可为麻黄汤及其类方的物质基础和配伍规律研究提供分析方法,也可为麻黄药材及其复方指纹图谱的建立提供参考。 3.2 本研究全方供试品溶液中麻黄碱、伪麻黄碱含量均较单味麻黄供试品溶液有所增加。 3.3本实验中选择融入了杂化颗粒技术而使pH耐受范围宽(1-12)的XTerraRP18色谱柱,达到了较好的分离效果。 谢谢！