生化检测原理.pptxVIP

第二部分：Spectrophotometry Principle 分光光度法检测原理 不同浓度，颜色深浅不一。所以：待测物浓度可以由检测其颜色深浅得到。没有颜色？双缩脲反应间接：通过生化反应生成有色物质，间接计算得到浓度。分光光度法的原理基础：Lambert-Beer Law ，I ——入射光及通过样品后的透射光强度；A——吸光度(absorbance) ；C——样品浓度；d——光程，即盛放溶液的液槽的透光厚度；k——光被吸收的比例系数；T——透射比，即透射光强度与入射光强度之比。简而言之，光被一定浓度介质吸收的比例与入射光的强度无关；在光程上每等厚层介质吸收相同比例值的光。 Lambert-Beer Law的适用范围：(1) 入射光为平行单色光且垂直照射.(2) 吸光物质为均匀非散射体系.(3) 吸光质点之间无相互作用.(4) 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生.(5) 待测物在一定溶度范围之内.为什么需要平行单色光？ 在非单色光的条件下，由于待测物质在各个波段下吸光系数 K 的不同，造成相关曲线也出现不同程度的偏离。 实际上，理论上的单色光是不存在的，我们所做的只能是让入射光的光谱带宽尽可能的小，要尽可能的靠近单色光。为什么仅适用一定范围内？ Lambert-Beer Law在有解离、缔合、生成络合物或溶剂化等会对比尔定律产生偏离。 解离是偏离朗