PCR技术原理与方法.pptVIP

基因组DNA 获取特定DNA片段 扩增特定DNA片段 1) 基因克隆 重组DNA 质粒DNA 基因片段 大肠杆菌 胰岛素 重组体 + 胰岛素基因 基因工程产品 2)基因检测 A’ 内源性病变基因 正常人 A 病 人 病原微生物基因 正常人 (-) 病 人 (+) 遗传病的诊断 基因缺失、插入或置换等 地中海贫血 珠蛋白链合成不平衡 A 正常人 病 人 正常 病人 六、PCR维护与保养 1.定期检测：半年至少1次 2.温度：反应温度、实际温度；降温时间。 2.样品池的清洗??? 3.热盖的清洗??? 4.仪器外表面的清洗????? 5. 使用注意事项：热盖、PCR管、样品台、电源、环境 主要内容 PCR概念 PCR原理 PCR技术参数 PCR操作步骤 PCR应用 PCR维护与保养 一、PCR概念 PCR又称聚合酶链式反应（polymerase chain reaction)，是通过模拟体内 DNA 复制的方式，在体外选择性地将 DNA 某个特殊区域扩增出来的技术。 二、PCR的原理 在微量离心管中,加入适量的缓冲液, 微量的模板DNA，4种脱氧核糖单核苷酸，耐热性多聚酶，一对合成DNA的引物，通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环，每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍，一般样品是经过30次循环，最终使基因