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2．组织和细胞超低温保存实验程序 (1)将培养5一7天的悬浮培养细胞，或培养10一15天的愈伤组织收集于保存试管中，每管0.5-1.0ml。 (2)将盛有材料的试管插入冰浴中，待温度平衡后，加入0℃预冷的冰冻保护剂(10％DMSO +0.5 mo1／L 山梨糖醇)，使保护剂稍淹过保存材料。在0℃放置30分钟。 (3)以1℃／分的降温速度从0℃降到-10℃，轻轻摇动试管，使试管内的溶液结冰。停留15－20分钟。然后以同样降温进度降到-30℃－-40℃，停留2小时，然后浸入液氮中。 (4)在液氮中贮存一定时期后，取出材料在37—40℃温水浴迅速化冻，化冻后立即转移到20℃水浴中。 (5)化冻后，用含3％蔗糖的液体培养基洗涤3次，为减轻和避免渗透冲击的伤害，培养液应逐步加入。 (6)洗涤后立即转移到新鲜培养基上进行再培养：或者不经洗涤，直接转移到半固体培养基上，或漂浮于液体培养基的滤纸上培养。先置于黑暗条件下培养15—30天，然后转移到光照下培养。 (7)待恢复生长后，统计存活率。此外，在化冻洗涤后，可采TTC法和FDA荧光染色法观测细胞的活力和存活率。 (8)当愈伤组织长到良好状态时，转移到分化培养基上，检验形态发生能力的保持情况。 (9)植株形态特征、生长发育及遗传性状的观察和分析． 1、茎尖超低温保存植物种类： 八、