WNT通路_培训课件.ppt

在细胞质水平靶向 wnt/β-catenin 信号信号 Wnt/β-catenin信号转导通路通过细胞内蛋白一蛋白的相互作用而受到严密调控。由于肿瘤抑制基因APC在结直肠癌中的核心作用，使针对该蛋白的β-catenin结合区域的阻断剂成为有效抑制肿瘤的物质。抑癌基因axin是Wnt/β-catenin信号转导通路的负性调控者，该基因突变是某些肿瘤发生的重要因素。转染野生型axin-1基因可诱导β-catenin聚集的肝癌细胞和结直肠癌细胞凋亡，并抑制其生长。Sekiya等报道， β-连环蛋白／T细胞因子抑制子(inhibitor of beta-catenin and T ceil factor，ICAT)也可诱导结肠癌细胞发生G2／M期阻滞并诱导细胞凋亡；ICAT与β-catenin相互作用，可干扰细胞核内β-catenin与TCF-4相互作用，负向调控Wnt信号通路。 β-catenin蛋白表达和和降解 Wnt信号异常的肿瘤都存在表达水平上调，因此靶向β-catenin的治疗引起人们的广泛关注。目前，反义寡核苷酸技术、RNA干扰技术及蛋白敲除技术处于研究阶段。针对β-catenin的反义寡核苷酸可以减少肿瘤β-catenin蛋白的表达，有效抑制肿瘤生长。 最近一些研究致力于通过降解β-catenin ，使其在人类肿瘤细胞中的表达活性降低，从而阻断Wnt信号通路，成为抗癌治疗的一个新靶点。有研究证明，突变的β-catenin可以通过细胞内Skpl／Cullin／F-box(SCF)遍在蛋白化作用机制而被降解。Liu等用嵌合体F-box融合蛋白形式加速了不依赖GSK-3β磷酸化而介导的β-catenin蛋白降解，以达到治疗肿瘤的目的。 在细胞核水平靶向Wnt/β-catenin信号转导通路 研究表明， β-catenin ／TCF复合物可以成为合理设计和高通量筛选抗肿瘤药物的有效靶点。Lepourcelet等设计出用于鉴别抑制TCF-4与β-catenin相互作用化合物的高通量药物筛选方法。另外，针对β-catenin ／TCF复合物介导的下游靶基因也成为抗肿瘤治疗的新靶点，这些靶基因包括c—myc、cyclin D1、PPAR、COX-2、CD 44和MMP 7等。 综上所述，Wnt／ β-catenin信号转导通路在人类肿瘤的发生、发展中起重要作用，以该通路分子作为抗肿瘤治疗靶点已引起众多肿瘤和药物研究者的极大兴趣，随之研发出越来越多的抗肿瘤药物与策略，这些药物与策略从不同水平阻断Wnt／ β-catenin信号转导通路而发挥抗肿瘤作用。深刻理解其调控机制，对于以Wnt／ β-catenin信号转导通路为靶点的抗肿瘤药物的设计具有重要意义。 β-catenin的磷酸化 Wnt信号途径 wnt/β-catenin通路靶基因 各种原因激活wnt/ wnt/β-catenin通路后均可致β-catenin在胞质内累积，游离的β-catenin进入核内与Tcf-4结合形成复合物，启动下游靶基因的异常转蒙从而促进肿瘤发生。至今已发现Y30多种WnVl3-catenin通路相关靶基因，如c-myc、eyclinDl、MMP7、CD44、Survivin和VEGF等，且不断发现有新的靶基因存在，这些靶基因多与细胞凋亡、细胞生长、血管生成及肿瘤侵袭转移有关，其中c-myc、cyclinDl是促进细胞增殖基因，Survivin与抗细胞调亡基因，研究证明它们在结直肠癌中表达增高。它们过表达使细胞增殖增加，调亡减少而促进肿瘤增长。 β-catenin基因自身突变 β-catenin定位于3p2l，有16个外显子，含3362个核营酸，编码-种胞内核蛋白，β-catenin蛋白分子量为92 kd，该蛋白与α-catenin、γ-catenin和p120ctn共同构成连环蛋白家族。它可与E-cadherin、APC蛋白、Tcf以及EGFR相结合，氨基端含有多个GSK-3β和酪氨酸蛋白激酶(tyrosineproteinkinase，TPK)磷酸化位点，其后为β-catenin结合部位，羧基端有活化相应靶基因转录功能。β-catenin与γ-catenin通过分别与E-cadenin胞内肽段结合再和α-catenin结合，介导细胞粘附，同时还参与Wnt途径的信号传导。目前对于结直肠癌β-catenin基因突变情况的研究结果差异较大，10％～50％。在APC基因完整的结直肠癌中β-catenin基因的突变率高达50％。 β-catenin基因突变，以外显子3最为常见，它是与复合体结合后发生磷酸化的位点，其缺失或突变会导致β-caten