寨卡等蚊虫传播传染病实验室检测策略_培训课件.pptVIP

蚊虫标本病毒分离—研磨 5 6 5、旋转研磨器快速反复研磨 6、直至蚊子大的组织块消失 7、使用毛细管将研磨液吸出 8、将研磨液加入无菌1.5ml EP管中 7 8 蚊虫标本病毒分离—研磨液离心 要使用冷冻离心机 4℃ 12,000 rpm 离心20min 3 装有研磨液上清的EP管要迅速插入冰浴中 蚊虫标本病毒分离—仪器研磨 时间短，效率高，可节省人力物力 有利于病毒存活，提高病毒的分离率 动物分离病毒法：乳小白鼠（3日龄） 优点，很敏感，易掌握；病毒可随传代次数的增加而增强，有利于病毒分离 但是，小白鼠本身存在多种病毒性疾病，往往会影响结果 组织培养分离法： 没有隐性感染 没有免疫能力的抵抗力 接种量大 培养条件易于控制 加速病毒的分离过程 C6/36：对蚊传虫媒病毒较为敏感，蚊传虫媒病毒分离的首选细胞 BHK-21：对绝大多数虫媒病毒敏感 BHK-21 C6/36 蚊虫标本病毒分离—常用分离方法 蚊虫标本病毒分离—感染细胞 1、吸出离心后研磨液上清 2、将研磨上清液加入到细胞管中 3、感染后的细胞培养管 4、放入孵箱中孵育1h （C6/36 在28℃孵育，BHK在37℃孵育） 1 2 3 4 蚊虫标本病毒分离—感染细胞 5、倒掉研磨液 6、使用无血清培养基洗1-2次 7、加入1ml含1%血清的维持液 8、培养1周，并逐日观察CPE 5 6 7 8 蚊虫标本病