ld土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 - 5班.pptVIP

引导学生理解样品稀释度不同的原因 * 计数法 稀释涂布平板法 显微镜直接计数法 比浊法 膜过滤法 （二）统计菌落数目 显微镜直接计数 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点： 膜过滤法是当样品中菌数很低时，可以将一定体积的水样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上(或一定面积中)的细菌数； 比浊法是在一定范围内，细菌的悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以借助于分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。 主要目的是排除实验组中非测试因素（无关变量）对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 -例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因：⑴土样不同 ⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) （三）设置对照 P22 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用： 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养 观察菌落数目。 （三）设置对照 主要目的是排除实验组中非测试因素（无关变量）对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 实验设计基本原则 1、平行重复原则 2、对照原则 3、单一变量原则 1.实验名称： 2.实验原理： 3.实验目的： 4.材料用具： 5.方法步骤：1、分组编号 2、处理（遵循实验设计的基本原则） 对照原则、单一变量原则（等量原则） 平行重复原则、科学性原则、可行性原则 3、观察记录（设计观察记录表） 6.实验预期： 7.实验结果的分析与评价： 8.实验结论： 二 实验设计 二 实验设计 1. 原理： 只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存； 选择培养基——分离； 稀释涂布平板法——计数。 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 二 实验设计 2. 实验流程图： 实验设计案例 二 实验设计 实验步骤： 土壤取样 样品系列稀释 涂布平板与培养 观察并记录结果 实验设计案例 （菌落计数） [资料一]土壤取样 ? 1、取样的位置： 土壤，天然培养基，含有大量的微生物，其中70～90％是细菌。在富含有机质的土壤层的3～8cm处中分布着绝大多数的细菌。 2、取样要求： 二 实验设计 3. 实验过程： 实验设计案例 铲去表层土3cm 铲子和信封均提前灭菌 ◆应在火焰旁称取土壤10g（器皿已提前灭菌） ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要 在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、 适于计数的平板 [资料二]样品的稀释 1、接种 2、培养： 3、观察：　　 分解尿素的细菌在30 ℃下培养 [资料三]微生物的培养与观察 细菌：30～37℃，1～2d;放线菌:25～28℃, 5～7d;霉菌: 25～28℃, 3～4d. a.每24h统计一次菌落数目 b.以“稳定菌落”为统计对象 菌落特征： 大小: 小，较小，中，较大，大 表面及质地: 干燥，湿润，粉粒状，颗粒状 粘稠，蜡质，胶质，紧密，絮状，绒毛状 透明度: 透明，不透明 颜色: 正面和反面都需要写 ????????????????????????????????????????? 细菌菌落 放线菌菌落 真菌菌落 三 操作提示 1. 无菌操作 2. 做好标记 3. 规划时间 请阅读P25“操作提示”与“结果分析与评价” 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml）