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细胞工程知识点(陈永)
植物组织培养简介
1.细胞工程(Cell Engineering):在体外对生物的细胞进行生长与分化的调控、遗传重组与改良,使其生产出人类所需要的产品。
2.细胞全能性假说是开展植物组织培养研究的理论基础;验证细胞全能性假说是开展植物组织培养研究的动力。
3.细胞分裂素与生长素的浓度比值决定着愈伤组织根或芽的形成。细胞分裂素/生长素的比值: 高:形成芽;低:形成根;相当:愈伤组织增殖,但不分化。
4.植物组织培养在植物性状改良上的应用:
①.胚培养可克服远源杂交不孕的困难;
②.花药(花粉)培养可大大缩短育种年限;
③.原生质体融合技术可克服有性杂交不亲和,创造远源杂种、甚至新的物种;
④.单细胞培养技术可用于突变体的筛选。
? 植物组织培养的设施
1.培养室所需要的设备:
①.培养架:培养架的设计既要考虑充分利用培养室的空间,也要考虑取放材料方便。
②.加温/降温设备:空调
③.光照和控光设备。分为光培养室和暗培养室。光培养室常用日光灯照明,并安置控制光照时间的自动开关。
2.瓶盖、瓶塞、或者封口膜的透气性能对材料的培养有显著影响,透气性能不好的,容器中湿度高(饱和),容易导致植物材料出现玻璃化(生理病态,植物材料呈水渍状,深绿色,刚脆,无继续培养的价值)
植物组织培养基
1.培养基的重要性:
1)植物材料生长的营养来源;
2)调节植物材料生长与分化的主要途径。
2.培养基的组成:
①.水:要求纯净。应用蒸馏水、去离子水,而不用自来水。
②.无机营养成分:
植物生长发育需要有16种必需元素:大量元素:C, H, O, N, P, K, Ca, Mg, S;微量元素:Fe, Cl, Cu, Mo, B, Zn, Mn。不同培养基的无机盐(特别是大量元素)的浓度差异很大。
③.有机营养:
有机营养(有机成分):维生素和氨基酸的总称。
常用:肌醇、烟酸、维生素B6、维生素B1和甘氨酸等。
其它维生素:维生素M(叶酸)、维生素B2(核黄素)、泛酸钙等。
其它氨基酸:谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺等
④.碳源:最常用的糖是蔗糖(sucrose),但也有时用葡萄糖(glucose)、果糖(fructose)或其它的糖(lactose, maltose),有时几种糖混用。糖是营养物质,但不是越多越好。培养基中糖的用量大多在10—60g/L,一般为20—30 g/L。
⑤.植物生长物质:植物生长物质是植物激素和植物生长调节剂的总称。
植物激素:植物合成的、微量就有显著生理效应的物质。
植物生长调节剂:人工合成的、具有植物激素相似作用的物质。
⑥.凝固剂:在植物组织培养中,琼脂(agar)是最常用的凝固剂,用量为6-12g/L。另外还有phytagel, Gelrite, 4g/L。
⑦.有机附加物:水解酪蛋白、水解乳蛋白、蛋白胨、胰蛋白胨、酵母提取物:用量为0.1-10g/L,一般为0.5-3 g/L。椰子汁:100-200ml/L。
⑧.其它物质:防止与减缓植物材料褐化的物质:
1)抗氧化剂:抗坏血酸(Vc)、L-半光氨酸、柠檬酸、二硫苏糖醇等。
2)吸附剂:活性炭、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
活性炭吸附无选择性;改善培养效果、促进生根。 PVP专一吸附酚类物质。
3.植物激素在植物组织培养中的作用:
①生长素:(1) 促进细胞分裂、增殖,导致愈伤组织的形成(2,4-DNAAIAA, IBA);(2) 控制器官的分化,诱导根的形成。(IBANAAIAA)
②细胞分裂素:促进细胞分裂、增殖,导致愈伤组织的形成;控制器官的分化,诱导芽的形成和增殖。
③赤霉素:赤霉素最显著的作用是促进细胞的伸长,也有打破种子休眠的作用。在植物组织培养中使用赤霉素主要是促进芽或茎的伸长。赤霉素对热不稳定,故不宜用高温法消毒。
④乙烯:乙烯促进果实成熟,加速植物衰老。植物组织培养极少使用乙烯(乙烯利),相反,而是尽量控制乙烯的产生。
⑤脱落酸:脱落酸是促进植物衰老的激素,植物组织培养很少用。在胚状体(embryoid)的诱导和培养中常常使用脱落酸,促进胚状体的成熟。
4.植物激素母液的配制:对于生长素类激素,也可用稀碱助溶;对于细胞分裂素类激素,可用稀酸助溶。激素母液也应在低温下保存。
5.高温消毒时应注意的问题:
①一定要先排气10 min,否则不能消毒不彻底;
②高温消毒后,培养基的pH值会下降0.2—0.5个pH单位;
③高温消毒过程中,培养基中有些物质会被破坏或发生沉淀。如蔗糖会水解成葡萄糖和果糖,葡萄糖变成葡萄糖酸等;有些物质甚至几乎完全被破坏,如赤霉素、玉米素等。物质破坏程度与消毒时间和压力有关。
6.过滤灭菌法:由于过滤消毒不会破坏培养基的成分和改变培养基的pH值,所以在原生质
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