實验方法-AFLP实验操作指南.docVIP

AFLP实验操作指南 实验操作流程 DNA样本的准备 把DNA样本用紫外光（或荧光）分光光度计精确的测取浓度，然后将其稀释成浓度为50ng/ul，体积为50ul的溶液，如果DNA样本不多，在保证浓度的情况下体积可以适当减少。 DNA酶切 反应体系 成 分 体 积（ul） 双蒸水 11.4 缓冲液（Yellow buffer） 4 EcoRI (10u/ul) 0.5 Mse I (10u/ul) 0.1 模板DNA（50ng/ul） 4 总体积 20 反映程序 37℃反应3个小时，最后保存于4℃。 检测 取4－6ul酶切液进行酶切效果检测，跑出的带以弥散状、无明显主带为好。 琼脂糖电泳用6×loading buffer： 名称 用量（武汉） 用量（广州） Ficell 400 （蔗糖） 12g 40g EDTA(0.5M PH=8.0) 12ul 10% SDS（十二烷基四磺酸钠） 6ml Bromphenol Blue（溴酚蓝） 25mg 25mg Xylene Cyanole FF（二甲苯青FF） 25mg 25mg ddH2O add to 100ml 100ml 连接接头 接头的制备 按公司说明书将引物单链稀释成高浓度(一般是5OD稀释成1650ng/ul)溶液储存于－20℃冰箱。 取部分引物单链稀释成100uM/l，然后两条