第七章层析2教案.pptVIP

⑷凝胶粒径：凝胶一般为球形,其粒径大小对分离度有重要影响,粒径越小，理论板当量高度越小,分离效率越高。 ⑸床体积:即1g干燥凝胶溶胀后所占有的体积。 ⑹空隙体积：层析柱中凝胶之间空隙的体积，即V0值。空隙体积可用相对分子质量大于排阻极限的溶质测定，一般使用平均相对分子质量为2000kD的水溶性蓝色葡萄聚糖。 2.1 凝胶过滤层析 3)影响分离的因素 1.线速度: a.HW40F凝胶的排阻极限小，在该凝胶中蛋白质的m = 0，故HETP = 2Dz/u ,由于Dz ∝udp) 故层析柱的理论板当量高度为常数。 b.HW55F凝胶的排阻极限较大,在此，m 0,在忽略Dz影响时, HETP∝ u 。 2.料液体积: a.在一定相对料液体积范围内，HETP为常数 b.之后在增加料液体积，HETP随料液相对体积的增加而急剧增大 c.意义：为得到较高的分离度，料液体积需根据溶质的m差别控制在适当的范围内，在不影响分离度的前提下取最大值 3.料液浓度： 依据GFC的原理，tR和HETP与浓度无关。但实验表明，当浓度较高时，洗脱曲线出现吐舌、拖尾、甚至双峰；使HETP极度上升。这主要为样品黏度高造成。经验表明，料液与流动相的黏度比应控制在2以内。 4.相对分子质量与分配系数配比： a.在GFC分级范围内m与M关系: m=a-blogM