分子生物学第05章核酸的分子操作程序.ppt

5 核酸的分子操作 工具酶的种类 工具酶的来源 限制性内切酶的发现 限制－修饰假说 完全甲基化和不完全甲基化 各种类型限制性内切酶的性质比较 Ⅱ型限制性内切酶的特点 表5－2 部分Ⅱ型限制性内切酶及其切割位点 限制性内切酶切割位点的多寡 同裂酶和同尾酶 Ⅱ型限制性内切酶所需反应条件 Ⅱ型限制性内切酶所需反应条件 限制性内切酶的命名 核酸的凝胶电泳 溴化乙锭结构式 表5－3 凝胶浓度与DNA分子的有效分离范围 DNA大小与迁移距离的关系 DNA分子的状态与迁移速度的关系 大分子DNA的电泳分离 脉冲电泳 交变脉冲垂直定向电场电泳 电场倒转凝胶电泳，FIGE 电场倒转凝胶电泳的分离效果 垂直凝胶脉冲电泳 钳位均匀电场脉冲电泳 钳位均匀电场电泳的电极分布（CHEF） 物理图谱的定义 图5－1 多限制酶消化法制作物理图谱 图5－2 部分消化法制作物理图谱 DNA聚合酶的性质 测序酶 DNA聚合酶的5’→3’聚合酶活性 切口平移标记核酸探针 图5－4 切口平移法制备32P标记的探针 Klenow片段的产生 随机引物标记法制备探针 图5－5 采用Klenow酶的随机引物标记法 逆转录酶 逆转录酶 T4 DNA聚合酶 T4 DNA聚合酶 末端脱氧核苷酸转移酶催化的反应 碱性磷酸酶 两种碱性磷酸酶 碱性磷酸酶的用途 T4 多核苷酸激酶 T4 多核苷酸激酶催化的反应 大肠杆菌DN