分子生物学实验程序.ppt

实验学时：20 学时 内容安排： 实验一 质粒抽提 实验二 聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段 实验三 DNA酶切鉴定 实验四 DNA片段回收 实验五 重组质粒的连接 实验六 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒 DNA的转化 实验一 质粒抽提 一、实验目的 学习液体培养大肠杆菌的方法； 掌握从大肠杆菌中提取质粒的原理； 释放出来的DNA遇到强碱性（NaOH）环境，就会变性。然后，用酸性乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中性，质粒DNA将迅速复性，而基因组DNA，由于分子巨大，难以复性。 离心后，质粒DNA将在上清中，而基因组DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出来。 三、实验试剂及器材 实验器材：电子天平、锥形瓶、气浴摇床、离心 机 实验试剂：溶液I 、溶液II、溶液III、TE、氯仿、 乙醇 五、注意事项 接种环接种菌落时，一定要冷却彻底，否则容易接种失败； 提取质粒过程中，每一步都尽量多吸取溶液，以得到更高的产率； 用TE溶解沉淀的时候，用移液器小心吹打几次即可。 一般细菌中的基因组DNA含量相当高，为什么利用碱裂解法提