第十四章基因工程常用技术.pptVIP

基因工程常用技术 ①凝胶电泳 ②细菌的转化和转染 ③核酸分子杂交 ④定点突变 ⑤PCR ⑥RFLP ⑦RAPD ⑧DNA序列分析 ⑨目的基因的分离和转基因植物、转基因动物等技术。 细菌的转化和转染 转化：指受体细胞从周围介质总共吸收外来DNA片段，使其基因型和表型发生相应变化 转染：转化的特殊形式，是用离体状态的噬菌体、病毒核酸感染细胞，以改变受体遗传组成 关键：①受体细胞是否处于感受态。诱导方法为：快速生长的细菌+0℃、CaCl2低渗溶液→细胞肿胀呈球状（感受态）+DNA→吸附+42℃短暂处理+MgCl2→吸收②为防止限制，提高转化效率，可选用无限制作用的突变体。 定点突变的诱发 这项技术是加拿大的M.Smith70年代创造，获1993年诺贝尔化学奖。 也称位点专一诱变。是一种反向遗传学方法。即将克隆基因在体外按预先的设计利用核酸酶、诱变剂等来诱发位点特异性突变，或将预先确定的碱基改变引入人工合成的寡核苷酸再组入基因中，然后将已知缺失、插入、碱基替换、移码等不同类型的突变基因导入受体细胞，再进行选择、分析突变表型。 这里仅介绍寡核苷酸定点突变 寡核苷酸定点突变 原理及步骤 核酸分子杂交 1968年由Boy Britten等人发明 原理：DNA或RNA（带互补的特定核苷酸序列）→混合（退火）→同源区段形成双链结构→杂种核酸分子（来源不同） 类型：Southern杂交；Northe