細胞培养传代冻存复苏操作规程(自编).docVIP

细胞培养程序 材料A、仪器1. 净化工作台2. 离心机3. 恒温水浴箱4. 冰箱（4℃）5. 倒置相差显微镜6. CO2培养箱7. 振荡混合仪8. 酶联免疫检测仪9. 移液枪10. 电磁力搅拌机11. 微孔滤器B、玻璃器皿1. 吸管2. 小烧杯（100ml）3. 废液缸C、塑料器皿1. 吸头2. 枪头3. 96孔培养板4. 15ml离心管5. 50ml离心管6. 胶塞D、其他物品1. 微量加样枪2. 红血球计数板F、试剂1. D-Hanks液2. 小牛血清3. RPMI1640， 4. 双抗（青霉素、链霉素）5. 0.25%胰酶. 二甲基亚砜（DMSO）. MTT溶液：称取250mgMTT，放入小烧杯中，加50ml培养液或平衡盐溶液在电磁力搅拌机上搅拌30min，用0.22um的微孔滤器除菌，分装，4℃保存备用，两周内有效。1）、组织块培养法?? 小块放置后,轻轻翻转培养瓶,使瓶底朝上,然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞,将瓶倾斜放置在37℃温箱内。?培养2~4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养3~5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物