生物工程下游技术第七章_生物大分子的色谱分离和纯化课件.ppt

§7.5 色谱定性和定量的方法 一、色谱定性方法 1.与标准对照 （1）相同色谱条件下，分别将标样和试样进行色谱分析，比较两者的保留值或相对保留值。 （2）如果组分较多，各峰距离较近，可在样品中加入标样后混合进样，对比混合前后的谱图。 （3）双柱法可进一步确证结果。 2.利用保留指数法定性 采用一系列物质作为定性的参照，如正构烷烃系列。规定正构烷烃的保留指数为100Z（Z代表碳原子数），其他物质的保留指数用靠近它的两个正构烷烃来标定。待测物的保留指数I可表示如下： 3.与其他方法结合定性 色谱与质谱、红外光谱等联用进行结构测定。色谱主要发挥分离的特长。 二、色谱定量分析 1.校正因子与相对校正因子 相同色谱条件下，某一组分i产生的色谱响应值－峰面积Ai或峰高hi与该组分的质量mi成正比，即： 式中，fi′或f i″为组分i在该检测器上的响应斜率，亦称定量校正因子，其物理含义是单位峰面积或峰高所代表的组分量。 实际工作中则采用一种标准物质的校正因子fs′来校正其他物质的校正因子fi′，得到一个相对校正因子f i。 式中，Ai,As,mi,ms,Mi,Ms分别代表组分i和标准物质s的峰面积、质量和摩尔质量。 2.定量方法 （1）归一化法 试样中的各组分都能流出色谱柱，且都有相应的色谱峰，则可用此法。组分i的质量分数ωi为