食品微生物檢验课程设计指导书.docVIP

 吉林工程技术师范学院  食品工程学院  《食品微生物检验》 综合实训   设计题目：《国标》沙门氏菌检测 学生姓名：王 林  班级学号：34 号  指导老师：金明晓 王陆玲    2012年11月30日 食品微生物检验综合实训 前言本标准代替 GB/T 4789.4-2008《食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验》。本标准与 GB/T 4789.4-2008 相比，主要变化如下——修改了标准的中英文名称；——修改了标准的范围；——修改了培养基和试剂；——修改了设备和材料；——修改了附录 A。本标准的附录 A、附录 B 为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为：——GB 4789.4-84、GB 4789.4-1994、GB/T 4789.4-2003、GB/T 4789.4-2008。 食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验1 范围本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella）的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：冰箱：2 ～5 。恒温培养箱：36 ±1 ℃，42 ±1 ℃。均质器。振荡器。电子天平：感量 0.1 g。无菌锥形瓶:容量 500 mL，250 mL。无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。无菌培养皿：直径 90 mm。无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。无菌毛细管pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。全自动微生物生化鉴定系统。?培养基和试剂缓冲蛋白胨水（BPW）：四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液?亚硫酸铋（BS）琼脂?HE 琼脂木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂沙门氏菌属显色培养基。 三糖铁（TSI）琼脂 蛋白胨水、靛基质试剂 尿素琼脂（pH 7.2）氰化钾 （KCN） 培养基赖氨酸脱羧酶试验培养基糖发酵管邻硝基酚-D 半乳糖苷（ONPG）培养基半固体琼脂丙二酸钠培养基沙门氏菌 O 和 H 诊断血清生化鉴定试剂盒：掌握沙门氏杆菌的检查方法通过对本课程的学习，要求学生掌握食品微生物检验的基础理论知识、沙门氏杆菌常规的检验原理，了解检验新技术的发展概况；并通过检验操作技能的训练，正确掌握微生物检验的方法和技能，包括微生物检验常用器材的使用方法和技能、生化试验和血清学试验方法和技能、微生物检验的样品处理技术、食品微生物卫生指标菌沙门氏杆菌的检验和报告的撰写等内容，对《中华人民共和国国家标准　食品卫生检验方法　微生物部分》（简称国标）具有较强的应用能力和执行能力，使学生能较好地胜任食品微生物检验的有关工作。同时还重视学生的职业道德教育和法制教育，重视培养学生的诚信品质、敬业精神和责任意识、遵纪守法意识、团结合作意识，以提高学生的实践能力、创造能力、就业能力，为毕业后的就业打下良好的基础。材料准备： 　　1．器材：?电子天平无菌吸管瓶培养皿试管、无菌毛细管精密pH试纸酒精灯、接种环等。　　．培养基：木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂?赖氨酸脱羧酶试验培养基方法步骤:（）培养 　　25?mL样品放入盛有225?mL?BPW的无菌锥型瓶中，振荡混匀。于36℃?士1℃?，18h进行培养。 1、增菌? 对已污染的被检材料先用煌绿增菌培养基增菌培养后再进行分离。37培养18～24h，观察其在各种培养基上的菌落特征。?1?mL，转种于10?mLTTB内，于42℃?士1℃?培养18h一24h。 2、分离培养?分别用接种环取增菌液1环，划线接种： 二个BS琼脂平板 36℃?士1℃? 40h一48h 二个XLD琼脂平板 36℃?士1℃? 18h一24h 二个HE琼脂平板 36℃?士1℃? 18h一24h? ? 观察各个平板上生长的菌落。　 　 沙门氏杆菌在木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂形成无色或与培养基颜色相同、透明或半透明、中等大小、表面光滑的菌落。 　（）生化试验? 钩取鉴别培养基上的几个可疑菌落分别纯培养，36℃?士1℃?培养18h-24h，必要时可延长至48h，观察结果。沙门氏杆菌只发酵葡萄糖，不利用乳糖和蔗糖，故在三糖铁培养基生长后，培养基底层呈黄色