伪狂犬病毒EP0基因特异性siRNA分子的合成与筛选及对病毒复制的影响资料.pptVIP

伪狂犬病毒EP0基因特异性siRNA分子的合成与筛选及对病毒复制的影响 汇报提纲 一、课题背景 二、研究内容与技术路线 三、结果与讨论 四、小结与展望 五、研究成果 一、课题背景 伪狂犬病毒(PRV)的潜伏感染问题是当前伪狂犬病防治与根除计划的主要障碍 潜伏感染的机理尚不清楚 二、研究内容与技术路线 三、结果与讨论 （一）伪狂犬病毒EP0基因的原核表达与抗体制备 （二）EP0基因特异性siRNA分子的合成与筛选 （三）EP0基因特异性siRNA分子对伪狂犬病毒复制的影响 （一）伪狂犬病毒EP0基因的原核表达与抗体制备 实现了EP0基因目的蛋白的诱导表达并将其免疫动物获得了相应抗体,ELISA检测效价达到了1：81920 pET-EP0的酶切鉴定 EP0蛋白表达的最佳诱导时间的摸索 用EP0蛋白胶条和包涵体免疫家兔制备抗体 ELISA检测抗体滴度 分析与讨论 确立了诱导后3h即达到最高表达量，之后增大诱导时间反而无助于表达量的提高。 分别尝试了用包涵体直接免疫和将表达菌体的SDS胶目的条带切割后加入生理盐水研磨再免疫家兔两种方法。 该抗体不仅可以用于蛋白质水平检测siRNA分子对PRV病毒EP0基因表达的干扰作用，还可用于检测多种不同来源的样品。 （二）EP0基因特异性siRNA分子的合成与筛选 EP0基因相关siRNA靶序列的分子设计、模板DNA的合