专题二微生物的培养与应用-知识点总结.docVIP

专题二 微生物的培养与应用 知识点 2.1 微生物的实验室培养 1．培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 2. 培养基按物理性质分为液体培养基（应用于工业或生活生产）、固体培养基（应用于微生物的分离和鉴定）和半固体培养基（常用于观察微生物的运动及菌种保藏等）。按成分分为合成培养基（用成分已知的化学物质配制而成，成分种类比例明确，用于微生物的分离鉴定）和天然培养基（用化学成分不明的天然物质配制而成，用于实际工业生产）。按用途分为选择培养基（加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需微生物的生长）和鉴别培养基（根据微生物的特点，加入某种指示剂或化学药品，来鉴别不同类别的微生物）。 3.培养基的化学成分包括：水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等。碳源包括CO2、NaHCO3等无机碳源和糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源包括N2、NH3、NO3-、NH4+等无机氮源和蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等有机氮源。只有固氮微生物才能利用N2。 4.培养基还需满足pH、特殊营养物质和氧气的要求。例：培养乳酸杆菌需添加维生素；培养霉菌需将pH调至酸性；培养细菌需将pH调至中性或微碱性；培养厌氧型微生物需提供无氧的条件。 5.无菌操作技术包括：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 6.消毒与灭菌的区别是：消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子），包括煮沸消毒法，巴氏消毒法 （酒精、氯气、石炭酸）和紫外线消毒法。灭菌指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，包括灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。 7.灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯 。 8.制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 （2）倒平板操作的步骤包括：①将灭过菌的培养皿放在酒精灯火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。②将锥形瓶的瓶口迅速通过火焰（灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染倒平板不将培养基溅在皿盖与皿底，这个平板能用来培养微生物空气中的微生物在皿盖与皿底平板划线操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线残留环上的菌种在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线接种环温度太高杀死菌种。 选择菌落数在30～300的平板计数。土壤取样1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。 3.当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，它能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红－纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，根据是否产生透明圈就可以来筛选纤维素分解菌，这种方法叫做刚果红染色法。 4.刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理：刚果红（染料）可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 5.实验流程：土壤取样→选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）→梯度稀释→将培养基上→挑选由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。因为培养基中纤维素占主要地位，纤维素酶产生的透明圈。方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。在选择培