RNAi在风湿性关节炎中的研究进展.docVIP

RNAi技术在类风湿性关节炎中的研究进展 丁庆军，刘明 综述 梁 统，周克元 审阅 （广东医学院生物化学与分子生物学研究所，广东 湛江 524023） [关键词] 类风湿性关节炎(RA); RNA干扰（RNAi）; 自身免疫 [中图分类号] R392 11 　[文献标识码] A 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis， RA)是一种慢性、致残性的自身免疫性疾病。临床表现为侵害对称性关节和关节周围组织肿痛，以关节滑膜病变为主的滑膜炎持久反复发作,导致关节内软骨和骨的破坏。尽管类风湿性关节炎的病因及发病机制至今尚不完全清楚，但大量研究表明，某些基因异常表达是RA发病的内在原因。因此，从基因水平上探讨治疗RA的途径将具有广阔的前景。RNAi技术作为一种新兴的基因治疗手段，与传统的基因治疗方式如反义寡核苷酸治疗等相比， RNAi具有高度的序列特异性，从而实现对目的基因的精确沉默；而且干扰效率高。RNAi还具有高稳定性、细胞摄取相对容易、毒性小等优点，为RA治疗带来新的希望。 1 RNA干扰的作用机制 RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象，是一种序列特异性的转录后基因沉默(post transcriptional gene silence,PTGS)。 目前,对于RNAi 的发生机制普遍认为是:外源性(如病毒)或内源性的dsRNA在细胞内被Dicer切割成21～23 nt的RNA片段，这些小片段即为小干扰RNA (small interference RNA, siRNA)。siRNA带有3′末端羟基，并且有2个突出的单链核苷酸尾巴及磷酸化的5′端，是RNAi的起始诱导物。Dicer是一种进化上保守的RNA酶Ⅲ蛋白酶，具有dsRNA特异性的内切核酸酶，还可以与siRNA结合形成沉默复合体(RNA induced silencing comp1ex ,RISC)。其中一条siRNA作为引导序列，按照碱基互补原则识别互补的收稿日期：2007-06-21；接受日期：2007- 基金项目：广东省社会发展领域科技计划资助项目（53025）。 作者简介：丁庆军（1975-）男，山东曲阜人，硕士生 TelE-mail:ddfding@126.com mRNA，并引导RISC结合mRNA。在消耗ATP的情况下将mRNA切割，有效地导致转录后基因的沉默 [1 ]。 RNAi技术在癌症、抗病毒、基因组等研究领域得以广泛的应用，目前，该技术在RA领域的研究和应用虽不广泛，但也逐渐开始有文献报道。 2 抑制TNF-α 基因表达 TNF-α是机体炎症反应与免疫应答的重要调节因子，效应与靶细胞的范围与IL-1β有很大相似性，能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PGE2和胶原酶，促进成纤维细胞增生，导致关节局部滑膜炎症和软骨组织破坏，TNF-α既能刺激IL-1，IL-6，IL-8的产生，又能刺激巨噬细胞增加自身的合成，在RA的细胞因子网络中起“中心犯罪”作用。传统治疗的研究表明，阻断TNF-α是有效的治疗策略，可以改善RA的病情。如表达人TNF-α的转基因小鼠可形成关节炎，用抗TNF-α抗体治疗可使关节炎症状减轻。加利福尼亚大学的Daniel E Furst博士及其同事在2005-12的J Rheumatol上报告了一种叫Pegsunercept的新药，对类风湿性关节炎(RA)有较好疗效，它实际上是一种肿瘤坏死因子(TNF)的抑制剂。研究显示，较高剂量组显示较大的临床改善，治疗组和安慰剂组的总体不良反应发生率相似[2]。 因此，以TNF-α的mRNA为靶点，采用RNAi技术特异性抑制TNF-α mRNA的表达，减少TNF-α的分泌，对降低RA损伤，保护关节细胞功能具有重要意义。Taishi P等[3]在对大鼠的研究中发现，针对TNF-α的siRNA在体外实验可以使TNF-α mRNA下降45%，但不影响IL-6的水平；在体内与对照组相比可使TNF-α mRNA显著下降，同时也使IL-6的mRNA水平降低，TNF-α反应的免疫细胞也是减少的。 Schiffelers RM等[4]以TNF-α为设计靶点，用局部注射法和电穿孔法将设计好的siRNA导入CIA（胶原诱导的小鼠关节炎模型）小鼠关节内，使其沉默TNF-α。结果，电穿孔法组强烈的抑制TNF-α进而抑制了关节的炎症，而局部注射法则没有治疗效果。 传统治疗的研究表明，TNF-α阻断药非常有效，但会出现某些不良反应，如感染、癌症、血管炎、狼疮样自身免疫性疾病、多发性硬化症样脱髓鞘疾病、肝脏疾病、血液学异常(再生障碍性贫血)、淋巴瘤、严重的变态反应等，不过