基础生物化学解释.ppt

* 2、酶的活力单位 ——U（activity unit）或者 IU（international unit） 1 U = 1 IU = 在最适反应条件下（温度25℃，最适pH和最适底物浓度下），一分钟内转化1 μmol底物所需的酶量 3、酶的比活力 比活力（Specific Activity）是指：单位重量的蛋白质中所含有的酶活力单位数，一般用IU/mg蛋白质来表示。 比活力可以代表酶的纯度，酶的比活力越高，说明酶的纯度越高。 二、底物浓度对酶促反应速率的影响 v 一级反应 混合级反应 零级反应 [S] 一级反应：底物浓度较低时， v = v0 = k c，反应速率与底物浓度成一次方程正比； 混合级反应：随着底物浓度的增加，反应速率和和底物浓度不成正比，介于一级反应和零级反应之间； 零级反应： 底物浓度增加到一定程度时，v = vmax=k，反应速率达到最大，与底物物浓度无关； 利用Henri的中间复合物学说来解释底物浓度对反应速率的影响，酶促反应的方程可表示为： S + E E + P ES k1 k2 k3 k4 当底物浓度较低时，只有少数酶参与反应生成中间产物，其他酶分子处于空闲状态，所以当底物浓度增加时，马上被空闲的酶分子结合生成中间产物，反应速率增加，呈现一级反应； 当底物浓度继续增加，酶分子渐渐饱和，反应速率不再和底物浓度成正比，为混合级反应； 当底物浓度足够大时，所有酶都参与了反应，反应速率达最大，此时继续增加底物浓度，反应速率不变，为零级反应 其推导过程包含三个假设前提： （1）E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即 V0=k3[ES] （2）在反应初始阶段，S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St] （3）在反应初始阶段，P→0 ，忽略由E+P形成ES这步反应，即： S + E E + P ES k1 k2 k3 底物浓度与酶促反应速率的数学关系——米氏方程 米氏方程的推导过程 给定反应的速率与各反应物浓度的乘积成正比，比例为反应速率常数K 米氏方程的意义 米氏常数Km的意义 所以米氏常数的意义为：当酶促反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度 Km值是酶的一个重要特征常数，单位为mol/L。只与酶的性质有关，与酶浓度无关 Km值可表示酶与底物之间的亲和力。Km值大表示亲和力弱，底物难与酶结合; Km值小表示亲和力强。因此可以用来判断酶的最适底物。 举例：P93 表6-1最适底物判断 米氏常数图示 Km是酶的特性常数，与pH 、温度、离子强度、酶及底物种类有关，与酶浓度无关，可以鉴定酶。 酶 底物 Km(mmol/L) 脲酶 尿素 25 溶菌酶 6-N-乙酰葡萄糖胺 0.006 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 6-磷酸-葡萄糖 0.058 胰凝乳蛋白酶 苯甲酰酪氨酰胺 2.5 甲酰酪氨酰胺 12.0 乙酰酪氨酰胺 32.0 米氏常数Km的求解——双倒数作图法 从米氏方程的双曲线作图求Km值很麻烦，若方程两边求倒数，则变得很容易： 三、温度对酶促反应速率的影响 最适温度 最适温度 一方面，温度提高，反应速度加快 另一方面，酶属于蛋白质，高温容易变性失活 最适温度：酶促反应速率达到最大时的温度 四、pH对酶促反应速率的影响 最适pH 最适pH 过酸或过碱环境会使酶变性 影响酶活性中心必须基团的解离程度 影响底物和辅基或者辅酶的解离，从而影响酶和底物的结合 最适pH：酶促反应速率达到最大时的pH 酶的最适pH通常与酶的来源环境有关 多数酶的pH在7.0左右 五、激活剂对酶促反应速率的影响 1. 激活剂的概念 凡是能提高酶活性的物质都叫酶的激活剂。 反之，凡是可以减弱、抑制甚至破坏酶活性的物质就称为酶的抑制剂。 2. 激活剂的类型 无机离子：包括阳离子（如K＋、Na＋、Ca2＋、Mg2＋、Fe3＋等）和阴离子（如Cl－、I－、CN－等）。 中小有机分子：如某些还原剂（半胱氨酸、巯基乙醇、谷胱甘肽、抗坏血酸等）和金属鳌合物（EDTA）。 蛋白质大分子：如蛋白酶对某些酶原的激活，某些蛋白激酶对酶分子的修饰。 六、抑制剂对酶促反应速率的影响 酶的失活作用：使酶蛋白变性从而引起酶活力丧失 酶的抑制作用：使酶活力下降但不引起酶变性 不可逆抑制作用：抑制不能被解除，酶活性不 能被恢复的抑制 可逆抑制作用：可通过加入其它物质或用物理方法（如透析、超虑等）解除的抑制 酶的抑制作用 1、不可逆抑制作用 很多不可逆抑制剂为剧毒物质 ——重金属、有机磷、有机汞、有机砷、氰化物、青霉素、毒鼠强等。 不可逆抑制