免疫学——第八章凝聚性试验概念.ppt

第八章 凝聚性试验 一.凝集试验 细菌,红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后,在有电解质存在时,抗原颗粒互相凝聚成肉眼可见的凝集小块,称为凝集反应. 参与反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素. 1.直接凝集试验 颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集现象的试验称作直接凝集试验. 波片法:定性试验 试管法:定量试验,可以检测血清中是否含有相 应的抗体及抗体的含量,以其两个加号以上 的血清最大稀释度为该血清的凝集价. 生长凝集试验:正在生长繁殖的菌体,由于抗体 的存在,可以凝集生长成团,借助显微镜可 以观测到. 2.间接凝集试验 将可溶性抗原(或抗体)吸附于与免疫无关的小颗粒(载体)表面,此吸附抗原(或抗体)的载体颗粒与相应的抗体(或抗原)结合,在有电解质存在的适宜条件下发生的凝集反应,成为间接凝集反应,也称为被动凝集反应.常用的载体有:动物的红细胞,聚苯乙烯乳胶微球,矽酸铝,活性炭等.吸附抗原后的颗粒称为致敏颗粒. 乳胶凝集试验 致敏乳胶免疫浊度法试验,诊断卡,玻片法试验. ▲正向间接血凝试验: 用抗原致敏红细胞,以检测血清中抗体. 出现++以上凝集的血清最大稀释倍数既该血清的血凝价. ▲反向间接血凝试验: 用抗原致敏红细胞以检测抗原称为反向间接血凝试验. ▲正向间接血凝抑制试验: 用抗原致敏的红细胞和已知的抗体来检测未知抗原. ▲反向间接血凝抑制试验: 用抗原致敏的红细胞和已知的抗体来检测未知抗体. ▲固向间接血凝试验: 利用聚苯乙烯血凝板作固向载体,吸附抗原或抗体,在吸附板上进行血凝试验,叫做固向间接血凝. 固向间接血凝与ELISA相似. 具体的操作方法有: 夹层法(测抗原):吸附标准抗体,封闭,待检 抗原,标准抗体致敏的红细胞. 双抗体法(测抗体):吸附标准抗原,封闭,待 检血清,标准抗抗体致敏的红细胞. ▲协同凝集试验:以葡萄球菌作为载体的凝集试验 二.沉淀试验 可溶性抗原(如细菌的内毒素,外毒素,菌体裂解液病毒的可溶性抗原,血清,组织浸出液等)与相应的抗体结合,在适量电解质存在下,形成肉眼可见的白色沉淀,称为沉淀试验. 参加沉淀试验的抗原称为沉淀原,,抗体称为沉淀素,因为沉淀试验抗原分子小,单位体积含量多,容易过量,所以经常稀释抗原,并以抗原稀释度作为沉淀试验的效价. 1.环状沉淀试验 一般作为抗原的定性试验,也可定量测抗体,出现白色沉淀带的最高抗原稀释倍数,为该血清的沉淀价. 2.絮状沉淀试验 抗原与抗体在试管内混合,在有电解质存在时,抗原抗体复合物可形成混浊沉淀或絮状凝集物. 3.免疫浊度法 抗原抗体结合后形成的复合物,在特定稀释液中极易自液相析出,使检样浊度发生变化,当抗体浓度固定时,在一定线性范围内,检样浊度与其中所含抗原量成正比. 浊度可通过浊度比色计测出. 4.免疫扩散 抗原抗体在琼脂凝胶(1%琼脂)中扩散,由近及远形成浓度梯度,当二者在比例适当处相遇,及发生沉淀发应.反应的沉淀因为其颗粒较大,故在凝胶中不再扩散,因而形成沉淀带. 单向单扩散 单向双扩散 双向单扩散 双向双扩散 把电泳技术与琼脂免疫扩散技术结合,则形成为一种新技术,称为免疫电泳,包括:(简单)免疫电泳,对流免疫电泳,火箭免疫电泳,抗原抗体交叉免疫电泳. 6.对流免疫电泳 8.抗原抗体交叉电泳 免疫学原理与技术 * Ab Ag 7.火箭免疫电泳 Ab Ag Ag 免疫学原理与技术