第三章基因克隆的载体.pptVIP

1.质粒的生物学特性 质粒的可转移性 革兰氏阴性菌的质粒可分成两大类： 接合型质粒 能在天然条件下自发地从一个细胞转移到另一个细胞（接合作用），如F、Col、R质粒等 非接合型质粒 不能在天然条件下独立地发生接合作用如Col、R的其它成员 某些非接合型质粒在接合型质粒 的存在和协助下，也能发生DNA转移，这个过程由 bom 和mob 基因决定 天然质粒的局限性 天然存在的野生型质粒由于分子量大、拷贝数低、单一酶切位点少、遗传标记不理想等缺陷，不能满足克隆载体的要求，因此往往需要以多种野生型质粒为基础进行人工构建。 （3）pGEM-3Z 装有两个噬菌体的强启动子 用于外源基因的高效表达 T7和SP6启动子特异性地由噬菌体DNA编码的RNA聚合酶所识别，因此相应的受体菌必须表达噬菌体RNA聚合酶，如： E.coli BL21（DE3）等 3. M13噬菌体的生物学特性 M13是线状的大肠杆菌噬菌体，颗粒内含有6047个核苷酸的闭合环状单链DNA基因组，其单链的基因组DNA经改造后可作为单链的DNA载体。 因为M13单链DNA的复制型（RF，replicative form）是呈双链环形，此时的DNA可以象质粒DNA一样进行提取和体外操作。不论是双链还是单链的M13 DNA均能感染寄主细胞。而且M13的颗粒不受