2013分生物实验讲义.docVIP

分子生物学实验 课程 讲 义 总学时：32\16 周学时：2 适用年级专业：生物技术2011级\生物科学2010级 开课时间：2012－2013学年第 2学期 授课教师姓名：胡凯 目录 实验一 基因组DNA的提取 实验二 基因组DNA的纯化 实验三 DNA的琼脂糖电泳检测 实验四 DNA的琼脂糖回收 实验五 PCR基因的扩增 实验六 质粒DNA的提取 实验七 核酸的荧光定量检验 实验八 大肠杆菌的感受态细胞制备 实验九 大肠杆菌的质粒转化 实验一 基因组总DNA的提取 一、实验目的与原理简介： 抽提的DNA可用于PCR、Southern blotting、DNA文库构建等操作。 细胞中DNA主要存在于细胞核内，称核DNA或染色体DNA， DNA约为109bp，如此细长的分子对任何机械力的作用都十分敏感。在DNA提取过程中，DNA分子的降解很难避免，因此提取得到的只是DNA分子的片段。DNA的提取常用的有以下两种方法： SDS（十二烷基硫酸钠）法：高浓度的SDS在较高温度下（55-65度）裂解细胞，破坏蛋白质与DNA的结合，使DNA释放出来，通过酚和氯仿抽提去除蛋白质、脂质、多糖等，通过RNase A 消化去除RNA，最后用乙醇沉淀DNA。该法操作简便，能满足大多数实验需要。 CTAB