高级生物化学chapter03Proteintargeting(inChinese) 案例.ppt

第三章 蛋白质寻靶 主要内容：本章主要讨论蛋白质是如何从细胞浆转运到各种各样的膜隔室, 如ER、高尔基体、溶酶体、线粒体、叶绿体、过氧化物酶体、细胞核, 以及是如何跨质膜的。 3.1 附着在内质网上的核糖体形成分泌蛋白和膜蛋白 膜结合的核糖体和游离核糖体实质上是相同的, 一个特定的核糖体是游离还是与糙面内质网结合仅仅依赖于它所制造的蛋白质的类型 膜结合的核糖体合成三种主要类型的蛋白质: 分泌型蛋白、溶酶体蛋白和跨膜蛋白 信号序列是蛋白质跨内质网膜转运的标记 信号序列共同特征: (1)它们长度的范围在13~36个残基之间; (2)信号的氨基末端部分至少含有一个带正电荷的残基; (3)通常有10~15个残基长的一个高度疏水区形成信号序列的中心, Ala, Leu, Val, Ile和Phe经常出现在这个区域。在此疏水核心区, 用一个非极性的氨基酸残基取代一个带正电的残基通, 通常会破坏信号序列的引导活性; (4)信号序列切割位点的氨基末端残基通常有一个小的, 中性侧链, 最常见的是丙氨酸(Ala)。 并不是所有的分泌型蛋白和质膜蛋白都含有跨内质网膜转运后被切割掉的氨基末端信号序列。 有些蛋白含有一个内部信号序列而起同样的作用。 胞浆蛋白通过在其氨基末端加信号序列可重新引导到内质网 信号识别颗粒(SRP)检测信号序列并使核糖体附着在ER膜上 GTP-GDP循环使信号序列从SRP上释放, SRP与其受体分离 受体的GTP结合形式与SRP结合更牢固, 从而释放出信号肽, 释放出的信号肽迅速与转运机器结合。 信号肽打开蛋白质转运通道 转运是通过信号序列和中止转移序列引导 转运和延伸在机制上是两个不同的过程,未折叠的多肽链是跨内质网膜转运的最适底物,新生的多肽链就跨内质网膜转运, 直到遇到终止转运序列为止。多种信号序列和终止转运序列使蛋白质在双分子层膜上往复缠绕,转运后大多数信号序列被切除。 ATP驱动的热休克蛋白作为分子伴侣结合新生蛋白并帮助其折叠 内质网内腔的新生多肽链并不立即折叠, 而是与分子伴侣蛋白结合, 保持数分钟的非折叠状态。新生蛋白质的氨基末端从内质网上出现比其羧基末端早许多秒甚至数分钟; 内质网内腔蛋白质浓度非常高, 可以达到200mg/ml, 这比体外重折叠的最适浓度(1mg/ml)大得多。因此, 新生肽链有产生许多机会发生杂乱的偏差性的互作。在没有分子伴侣的存在下, 众多的新生肽链将变成复杂的缠绕状态。分子伴侣通过阻止不正常的分子间互作来协助折叠。在合成完成之前, 分子伴侣忠实地保护着新生出的肽链部分。 内质网内腔中的主要分子伴侣是BiP即结合蛋白(Binding protein)。它是热休克蛋白家族(HSP)中的一个78kd的组成的成员。 3.2 糖蛋白从内质网上的多萜醇 供体上获得核心糖结构 许多分泌蛋白和膜蛋白都含有共价连接的碳水化合物组分，糖蛋白中寡糖单位的生物合成是在一个活化载体上, 构建一个稍微较大的通用寡糖模块, 然后这个活化载体将此通用寡糖模块从内质网膜内腔侧转移到一个正在合成的多肽链上。这个载体就是磷酸多萜醇。 葡萄糖的缺乏是糖蛋白已完全折叠正准备转运到高尔基体的信号 糖蛋白上的3个葡萄糖残基和其中的1个甘露糖迅速从N-糖苷键连接的寡糖上切除,如果蛋白质未折叠或折叠错误, 葡萄糖又将回加到N-糖苷键连接的寡糖上去。此反应循环在决定一个糖蛋白是否正确折叠, 从而为转运到高尔基体作好准备 葡萄糖糖基化和切除的多次循环, 以及只有葡萄糖糖基化了的糖蛋白才能与钙联蛋白结合, 在控制从ER输出蛋白的质量方面起着关键作用 转运囊泡携带蛋白质从内质网到高尔基体进一步发生糖基化和分选 高尔基体有两个主要作用： 1.糖蛋白的碳水化合物单位在高尔基体中发生改变和精细化 2.高尔基体是细胞主要的分选中心 转运囊泡出芽和融合的过程中 保留了膜的不对称性 在囊泡转运中, 膜的不对称性得到保留 转运囊泡和高尔基体的管腔侧对应于内质网的管腔侧 内质网和其它细胞胞器膜的内腔侧对应于质膜的外表面 一旦一个蛋白进入内质网, 它将再也不能回到细胞浆 小的GTP结合蛋白、有被蛋白、SNAPs和 SNAREs在囊泡转运中起重要作用 当分离出来的高尔基体叠积体与细胞浆和ATP培养, 其膜囊上出芽产生了许多约75nm直径的囊泡。这些囊泡最初覆盖有一组有被蛋白，它们在膜上形成一个包被体外壳。一种称为ADP-核糖基化因子的较小的GTP结合蛋白, 也是需要的。供体膜节段上包被的形成增加了其曲