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第一章 细胞生物学绪论 细胞生物学概念：是从细胞的显微、亚显微和分子三个水平对细胞的各种生命活动开展研究的科学。 细胞生物学的研究对象：以细胞为研究对象。 细胞生物学的研究方式：①从细胞的表型特征入手，探索隐藏在其背后的分子机制②从基因或蛋白质等生物大分子入手，了解其对细胞功能或行为的影响。故而细胞生物学也被称为细胞分子生物学或分子细胞生物学。 细胞生物学发展的几个主要阶段：①细胞的发现与细胞学说的创立②光学显微镜下的细胞学研究③实验细胞学阶段④亚显微结构域分子水平的细胞生物学 细胞学说： ①‘一切生物，从单细胞生物到高等动物和植物均由细胞组成，细胞是生物形态结构和功能活动的基本单位。’②‘一切细胞只能来自原来的细胞。’ 第三章 细胞生物学的研究方法 光学显微镜分辨率及公式： ①显微镜或人眼在25cm的眀视距离处，能分辨被检物体微细结构最小间隔的距离，普通光学显微镜的分辨极限是0.2μm ②分辨率公式：R=0.61λ／n .sin ( n=聚光镜和物镜之间介质的折射率，空气为1，油为1.5 ( =标本对物镜镜口张角的半角，sin (的最大值为1 λ=照明光源的波长，白光0.5μm 生物样品制备的过程： ①固定：可使生物大分子交联，蛋白质成分凝固，防止细胞自溶和破坏而产生人工假象。常用固定剂：甲醛、戊二醛、乙醇 ②包埋：使组织形成硬块，防止样品移位，便于切片。常用包埋剂：石蜡、树脂 ③切片：切成1～10μm的薄片 ④选择性染色：增大反差 荧光：细胞中的某些物质（如叶绿素）经紫外线照射后能发出可见光线，称为荧光。 自发荧光：由细胞本身存在的物质经紫外线照射后发出的荧光。 诱发荧光：一些细胞成分本身经紫外线照射后不发荧光，但用荧光染料（酸性品红、甲基绿、吖叮橙等荧光色素）进行活体染色或固定后切片染色，就能在荧光镜下看见荧光，这种荧光叫诱发荧光。 共聚焦的概念：是指物镜和聚光镜互相共焦点，亦即两者同时聚焦到一个点，保证了只有从标本焦面出发的光线聚焦成像，焦面以外的漫射光不参加成像，大大提高了分辨率，使图像更加清晰。 透射电镜标本制备过程： ①取材:尽可能保持生活状态,避免损伤必须耐真空由于电子穿透力弱,标本必须超薄标本反差应尽可能大(生物材料原子系数低,图像反差差,不易出现明暗差别) ②固定:为防止生物样品在死亡后和脱水过程中产生结构改变,离体生物标本迅速固定。常用戊二醛和四氧化锇固定戊二醛在蛋白质分子之间形成共价键,将它们交联在—起。四氧化锇除与蛋白共价结合外,还对脂类有良好的固定效果。 ③脱水:标本必须置于高真空中进行电镜观察,但电镜不能观察含水的生物标本，因此需经脱水处理。另外由于包埋剂与水不溶，用脱水剂可将组织中游离水脱去，有利包埋。 ④包埋:为使柔软生物组织制成超薄切片,并使切片耐受高真空、电子轰击,则在切片前将标本进行包埋,常用环氧树脂。 ⑤切片:电子穿透力很弱,需将样品制成50～100nm厚的薄片。 ⑥染色:生物分子由原子序数低的轻元素组成,.它 们散射电子能力弱,在电镜下几乎不存在明暗反差,为加大生物样品反差,进行染色。常用的染色剂：醋酸铀、枸橼酸铅。 负染法：将病毒、纤维、核糖体或分离的生物大分子样品放于覆有亲水性支持膜的载网上,滴加磷钨酸,样品干燥后重金属盐沉积于样品周围使样品和背景形成显著的明暗对比,这种染背景而不染样品的方法叫负染。 扫描电子显微镜的特点：①高的分辨率②很强的立体感③放大倍率范围广④应用范围广⑤样品适应性大⑥样品制备简单 冷冻蚀刻复型电镜技术：将标本用液态超低温冷冻,真空中割断,升温使冰升华,细胞内外凡含水多的地方因失水而下陷,膜和其它一些结构显露出来,增强了断面的浮雕效果－蚀刻。标本蚀刻后以45°喷金,90°喷碳后将组织溶解掉,剩下的碳-金属膜就是复型。将复型膜置于透射电镜下观察,可观察蚀刻面所暴露的各种微细结构。 第四章 细胞膜与物质的跨膜运输 膜脂：细胞膜上的脂类称为膜脂，它是细胞膜的基本组成成分，形成膜的基本骨架。 膜脂的组成成分：磷脂；胆固醇；糖脂 磷脂分子主要类型：甘油磷脂和鞘磷脂 胆固醇的结构：双亲性分子，极性头部为羟基团，非极性疏水结构为固醇环和烃链。 胆固醇的功能：调节膜的流动性，增强膜的稳定性。 糖脂分子的功能：作为某些分子的受体，与细胞识别及信号转道相关。 膜蛋白的基本类型：①内在膜蛋白②外在膜蛋白③脂锚定蛋白 脂锚定蛋白的结合方式：胞质侧的蛋白以共价键的方式与脂双层中的碳氢链结合；质膜外表面的蛋白以共价键与磷脂酰肌醇相连的寡糖链结合 膜糖类的功能：有助于蛋白质在膜上的定位与固定，参与细胞识