第二章_分子克隆工具酶.ppt

基本特性：以RNA为模板聚合cDNA链 3’AAAAAAAAAAAAAA 5’mRNA 5’TTTTTTTTTTTT oligo (dT) 12-18 反转录酶 Mg2+ dNTP 3’AAAAAAAAAAAAAA 5’mRNA 5’TTTTTTTTTTTTTT 3’cDNA Ⅱ型核酸内切酶的多酶联合酶解 　对盐浓度要求相同的酶，原则上可以同时酶切，对盐浓度要求不同的酶，可采取下列方法： 　(1)使用较贵的酶的盐浓度，加大便宜酶的用量，同时酶解；(2)低盐酶先切，然后补加盐，高盐酶再切；(3)一种酶先切，然后更换缓冲液，另一种酶再切。 2.2 甲基化酶（Methylase） 2.2.1 甲基化酶的 种类 o 在真核和原 核生物中存在 大量的甲基化酶 （methylase）。 o 原核生物甲基化酶作为限制与修饰系统中的一 员，用于保 护宿主 DNA不被相应的限制酶所切割。 1．Dam甲基化酶 o Dam可在GATC序列中的腺嘌呤N6位置上引入 甲 基。 o 有些限制酶对Dam甲基化的DNA敏感，不能切 割相应的序列，如BclⅠ、ClaⅠ和 XbaⅠ等。 o 对甲基化不 敏感的有 Bam HⅠ、Sau3AⅠ、 BalⅡ和PvuⅠ等。 MboⅠ和Sau3AⅠ识别和切 割位点相同 ，但其差 异就 在于前者对甲基化 敏感。 2．Dcm甲基化酶 o Dcm识别CCAGG 或CC TGG序列