第7章 球菌[参考].ppt

二、临床意义 淋病奈瑟菌 致病因素 菌毛 脂多糖 IgA1蛋白酶 外膜蛋白PⅡ 所致疾病 单纯性淋病 盆腔炎 口咽部和肛门直肠淋病； 淋菌性结膜炎 播散性淋病 微生物学检验 奈瑟菌属的基本特性 形态结构 革兰阴性双球菌，菌体直径0.6~1.5μm，形似双肾或咖啡豆样，凹面相对 抗原成分 脑膜炎奈瑟菌 荚膜多糖抗原 具有群特异性。分为至少13个血清群,与人类疾病关系密切的主要是A、B、C、Y及W-135群。A群及C群是引起流行性脑脊髓膜炎的主要血清群。 外膜蛋白 淋病奈瑟菌 菌毛蛋白抗原、外膜蛋白抗原、脂寡糖抗原 培养特性 大多数奈瑟菌属细菌需要在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏感，在培养基中需加入可溶性淀粉。需氧生长，初次分离需要5%~7%CO2和高湿度刺激生长。最适生长温度35~37℃，低于30℃不生长。 血琼脂平板或巧克力（色）琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰蓝色菌落； 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状的菌落。在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜。 脑膜炎奈瑟菌于孵育24小时后在培养基上发生自溶。 抵抗力 奈瑟菌属细菌对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感。对青霉素敏感，但近年来由质粒介导的β内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多。 生化特性 菌 种 在巧克力平板上的菌落形态 MTM ML NYC 生长试验 氧化分解产酸 硝酸盐还原 多糖合成 DNA酶 巧克力平板或血平板（22℃） 营养琼脂 （35℃） 葡萄糖 麦芽糖 乳糖 蔗糖 果糖 脑膜炎奈瑟菌 灰褐色、半透明、光滑1～2mm + - V + + - - - - - - 淋病奈瑟菌 灰褐色，半透明，光滑0.5～1mm + - - + - - - - - - - 卡他莫拉菌 浅红棕色，不透明，干燥1～3mm V + + - - - - - + - + 奈瑟菌属的临床检验程序 1.标本采集 脑膜炎奈瑟菌 无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本，采集后立即送往实验室，或用血平板进行床边接种后置35℃孵育。血液标本接种在血液培养瓶中置35℃孵育。标本运送时需要35℃保温。 淋病奈瑟菌 用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处停留10~15秒时间，蘸取阴道和宫颈分泌物； 采集尿道分泌物时应弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本； 尿液可作为检查标本； 直肠肛拭标本应废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物； 新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物。 标本直接检查 显微镜检查 脑脊液 直接或经离心后取沉淀涂片 皮肤瘀点渗出液涂片 革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。 标本直接检查 显微镜检查 疑为淋病的标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查。 男性尿道分泌物和新生儿眼结膜分泌物标本中见到中性多形核细胞内、外较多的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似淋病奈瑟菌”。 由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居，当女性宫颈或直肠拭子标本涂片中见到胞内、胞外大量革兰阴性双球菌时，必须由培养结果加以证实。 抗原检测 胶乳凝集试验 包括脑膜炎奈瑟菌A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体 核酸检测 脑膜炎奈瑟菌 检测靶片段的基因有16S rRNA 基因、转录调控基因crgA、荚膜转移基因ctrA和插入序列IS1106等 淋病奈瑟菌 隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA 甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA 探针、rRNA 基因探针和porA 基因。 分离培养与鉴定 分离培养 脑脊液 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板 咽拭子或鼻咽拭子 接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin（MTM）、GC-Lect、New York City（NCY）等培养基。 血液标本 经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力（色）琼脂或羊血琼脂平板上。置5%~7%CO2 35℃孵育培养，每隔24小时观察平板。 疑为淋病奈瑟菌感染的标本接种于 选择培养基如MTM、Martin-Lewis（ML）或NYC。立即置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育。每隔24小时观察平板。 鉴定 初步鉴定 直径1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落，涂片革兰染色见阴性双球菌，氧化酶和触酶试验阳性可初步确定为奈瑟菌属。 最终鉴定 葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌；用分型血清确定血清型别。 葡萄糖发酵试验