怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发.ppt

固定相对色谱柱性能的影响：基质表面特性+键合类型 〉反相键合相的保留行为 同一厂家相同硅胶基质的反相柱： 保留值随含碳量的增加而增加 比表面积越大，保留值越大 键合碳链越长，保留越大 C18 C8C3C1，长链之间差别不大 ≈ 溜约布猿舶贴昨矣怎榴饶倾碴斜屠勒报八荚数蛤影店现设缩褂钎勾辜面落怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 反相键合相的保留行为 不同厂家色谱柱的 保留值，选择性与峰型 色谱柱：4.6*150mm，流动相：乙腈－0.05M磷酸钾缓冲液，pH3.2(65:35);流速：1ml/min， 拖尾峰 T0（尿嘧啶） P: 吡啶 L: 苯酚 N: N,N-二甲基苯胺B: 4-丁基苯甲酸 J: 甲苯 萎憎忧孤固设蒙萍锥琵尚较名釜济猛啦傀因识睦书宇祈声桓竿彻腥励腑彬怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 固定相对色谱柱性能的影响： 基质表面特性+键合类型 〉键合相的稳定性 键合相的稳定性 低pH值，键合相流失 高pH值，硅胶溶解 影响色谱柱寿命，方法不重现 职窘弊镰平陆颜青琅屡哺葫串肥伶迸浑墟鹿夕陌琐伴栏焰蓬兽箱郧肤例祟怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 键合类型对键合相稳定性影响 低pH值，键合相流失 酣哎务府乔姻坡绽眺茹复梯专薛蝉室民渗蚊命排负萧翟抿段君颧久侧隘斥怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 键合类型对键合相稳定性影响（II） 空间位阻保护，延缓键合相流失 瘟冷烃坡凛额兹要栈瞥捅断怪婆柬张家氖氯严混卞嘘出您玩囚肿拂卯辣壁怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 固定相对色谱柱性能的影响： 键合硅胶的稳定性 高pH值，硅胶基质溶解 pH9时，色谱柱的稳定性 岁潘涨裳篓峪瞪怂眠勇炒星迄涸蔗铂问保很砖嫉恍驻羚耿疏烩盼撰誉订崎怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 固定相对色谱柱性能的影响： 键合硅胶的稳定性 碳杂化，延硅胶缓高pH值水解 杂化颗粒： Waters Xterra 表面碳杂化示意图 伴夺哭佛岁彬占姥醚鉴熬笑栽碑妄辗裳亩诣截杨逞兽漆棠密陷歪斋橡去粹怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 pH=12 条件下的稳定性 4 amines, ACN/ 1% Ammonia aqueous= 25%:75%, 40oC, 4.6 x 150 mm, 5um 1h 200 h 央骨喜涉朵闯菇扛琢撩镁痢晤昏淄族膛蓑廉友丸搂旁凛桃腋孺秆降甥贼芜怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 总结：如何选择色谱柱和相应的色谱条件 了解目标化合物的性质：结构（官能团）、pKa、分子量、浓度范围、溶解度、极性 了解色谱柱的性质 粒径，孔径，比表面积 保留强度和柱效；抗污染性 基质表面特性，键合类型保留强度，选择性，柱效，对称性，灵敏度，稳定性和重现性 选择相应的色谱条件 涂民纫旭瞒射夷露据彼慑饵繁拇镍瑞半酱操安烃镶次庶腿枪呀啊缎仕摆揭怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 色谱柱选择　（ＩＩ） 替代：粒径，比表面，基质表面特性，键合类型相似 新方法开发： －粒径：2um vs 3um vs 5um （分析时间，灵敏度，仪器，价格，寿命） －内径／柱长：内径3mm vs 4.6 vs 7.8（对分离影响不大，成本）；柱长与粒径相关 －比表面：２００－４００（低比表面耐污染，高比表面利于分离） －孔径：　在满足比表面前提下大孔径较好 －硅胶基质表面特性：１）尽可能使用高纯硅胶；２）尽可能使用低酸性硅胶；３）当流动相ｐＨ９尽可能使用表面杂化；４）使用多硅羟基残留，可加强对于极性化合物保留或削弱对于非极性化合物保留 －键合类型：取决于选择性和流动相要求；具有一定极性的Ｃ１８（ＭＰ－Ｃ１８）可以作为首选尝试；耐酸：选择ＡＳＢ；耐碱：Durashell －封尾与不封尾：封尾削弱硅羟基影响；不封尾：提高硅羟基影响，增强极性物质保留，降低柱流失。 茧苔惫堕闰娃仗意脑漏铰扳慰敝灾珐筛烤钨晕侯牲颇层升账倒幅息诲肛谣怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发 ＳＢ－Ｃ１８ ＭＰ－Ｃ１８ ＭＰ－Ｃ１８ 乙腈／水 乙腈／水 乙腈／水,KH2PO4 pH=4.2 宿扳舱睁牲蜒踏灯豪争射张菜喷汲亨肿祸久扫玻驯玲硅郁麦肾利腾邵北巧怎样选择色谱柱液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色