多功能显微镜的使用解剖.ppt

* * 第一节 生物制片技术 一、昆虫生物制片方法 按封固剂的使用分： 1、暂时封片法 不使用封固剂 2、永久制片法 用封固剂封片 生物制片技术多功能显微镜的使用 按材料处理方法分： 1、整体封片法： 将微小的昆虫或昆虫的部分器官整体封片。 2、涂抹制片法 昆虫的疏松组织直接涂抹在载波片。 3、压碎制片法 将松软的组织在载玻片上，用盖玻片压碎展平的一种方法 4、离散制片法 借助药物将组织结合物溶解、分离的制片方法。 5、组织切片法 观察昆虫组织器官结构形态的制片方法。 分为： 石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、超薄切片法。 二、石蜡切片 把材料包埋在石蜡中，连同石蜡一起切片 主要过程： 取材→固定→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→脱蜡→复水→染色→脱水→透明→封固 第二节 多功能显微镜的使用 一、显微镜的类型 显微镜 非光学显微镜 光学显微镜 普通显微镜 特种显微镜 多功能显微镜 实体显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 偏光显微镜 紫外光显微镜 倒置显微镜 α 二、显微镜的光学技术参数 1、数值孔径（NA numerical aperture） NA ＝ η·sinα η －介质折射率 α－孔径角的一半 η －介质折射率，香柏油为1.515 α－孔径角的一半，小于90o。 干燥系物镜的NA值小于1， 油镜的 NA值最大为1.4 2、分辨率 光学仪器能够区分两个相临物点之间的最小距离。 0.61λ 0.61λ d = = η·sinα NA λ－光波长 可见光波长400－700 m μ，平均550 m μ 光学显微镜的分辨率d最小为0.2 μ m 提高分辨本领的措施： （1）降低光波长 （2）增大介质的折光系数 （3）增大孔径角 （4）增加明暗反差 0.61λ d = η·sinα 3、放大率 总放大率M＝物镜放大率（Mob）x目镜放大率（Moc） Δ —镜筒长度（标准镜筒长160mm） Mob＝ F1 —物镜焦距 250 —明视距离（mm） Moc＝ F2 —目镜焦距 Δ 250 M ＝ x F1 F2 有效放大倍数M有效： d肉眼 — 肉眼分辨本领 M有效= d仪器 — 仪器分辨本领 人肉眼在250毫米远处分辨率为0.2mm。 光学显微镜的有效放大倍数应为1000倍。 总放大率经验值： 显微镜的最适的总放大率，是标准镜筒长下，所使用的物镜NA值的500－1000倍。 超出此范围称为“无效放大”。 4、焦深 K·η D= M ·NA 焦点深度，与总的放大倍率、物镜的数值孔径成反比。 增加标本周围介质的折射率可增加焦深。 5、现场直径 　　指显微镜下看到的视场内所能容纳被检物体的实际范围。 　 FN　 　目镜视场数 Φ＝ Mob　　 物镜放大倍率 6、镜像亮度与视场亮度 （1）镜象亮度与物镜数值孔径的平方成正比 （2）镜象亮度与总放大率的平方成反比 镜像亮度：显微镜下图像的明暗程度 视场亮度：显微镜下整个视场的明暗程度 7、复盖差 盖玻片厚度不标准产生的相差。盖玻片标准厚度0.17mm 放大倍率越高、NA越大，复盖差越明显。 8、工作距离 物镜前透镜到被检物体之间的距离。 放大倍率越高工作距离越小，40Χ 物镜不超过0.6mm，100Χ 物镜不超过0.2mm。 三、象差 1、色差 不同颜色的光通过透镜的折射率不同 色差的校正: （1）采用单色光作光源 （2）利用凸、凹透镜的色差彼此相反，将其胶合在一起消除色差。 2、球差 透镜球面上，轴线上与四周光线折射率不同造成。 球差的消除措施： 利用凸、凹透镜的球差彼此相反，将其胶合在