番茄抗细菌斑点病基因Pto的图位克隆.pptVIP

图位克隆的原理和步骤 ——以Pto基因的克隆为例 图位克隆 图位克隆（Map-based cloning） 又称定位克隆（positional cloning），1986年首次由剑桥大学的Alan coulson提出。 用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的，无需预先知道基因的DNA顺序，也无需预先知道其表达产物的有关信息。它是通过分析目的基因与已知分子标记的连锁关系来确定目的基因在染色体上的位置。 1992年拟南芥ABI3基因（Giraudat et al., 1992）和FAD3基因（Arondel et al., 1992）首先通过图位克隆的方法分离出来。 图位克隆的主要步骤 初步定位 构建连锁图谱 精细定位 初步定位 构建连锁图谱 精细定位 分离群体：F2、BC1、DH等 分子标记：SSR、CAPS AFLP、 RFLP、RAPD等 群体大小：100-200单株 一般通过初步定位可以筛选出距离目的基因5-10cM的侧翼标记。 初步定位 构建连锁图谱 精细定位 整合已有的遗传图谱，将不同类型的分子标记整合到一起； 对于已经测序的物种，根据目的基因附近的DNA序列设计新的分析标记； 利用比较基因组的共线性，