四大色谱法的原理与应用.ppt

四大色谱法的原理与应用 目录 吸附色谱法 分离机制：吸附色谱法是利用吸附剂对被分离化合物分子的吸附能力差异，而实现分离的一类色谱。包括气固吸附色谱法和液固吸附色谱法。 吸附剂：硅胶、氧化铝、活性炭、聚酰胺等。 1.硅胶吸附色谱的应用比较广泛，中药各类化学成分可用其分离,经典液相柱色谱和薄层色谱使用一般硅胶，气相色谱和高效液相色谱常用球形或无定形全多空硅胶和堆积硅珠。 2.氧化铝吸附色谱主要用于碱性或中性亲脂性成分的分离，如生物碱、甾、萜类等成分； 3.活性炭主要用于水溶性物质像氨基酸、糖类及某些苷类； 4.聚酰胺色谱以氢键作用为主，主要用于酚类、醌类如黄酮类、蒽醌类及鞣质类成分的分离。 气固吸附色谱的流动相为气体。 液固吸附色谱的流动相为有机溶剂，其洗脱能力主要由其极性决定，强极性流动相占据吸附中心的能力强，其洗脱能力强，使组分的吸附系数值小，保留时间短。 常见化合物的吸附能力有下列顺序 烷烃烯烃卤代烃醚硝基化合物叔胺酯 酮醛酰胺醇酚伯胺羧酸 分配色谱法 分离机制：分配色谱法利用被分离组分在固定相和流动相之间的分配系数的不同而达到分离。包括气液分配色谱法和液液分配色谱法。 气液分配色谱法的流动相是气体，常为氢气或氮气。 液液分配色谱法的流动相是与固定液不相容的液体，根据固定相和流动相的极性相对强度，分为正相分配色谱和反相分配色谱 正相分配色谱流动相极性弱于固定相的极性。常用的固定相有氰基与氨基键合相，主要用于分离极性及中等极性的分子型物质。 反相分配色谱流动相的极性强于固定相的极性。常用的固定相有十八烷基硅烷（ODS）或C8键合相，主要用于分离非极性及中等极性的各类分子型化合物。 分配色谱的洗脱顺序是由组分在固定相或流动相中溶解的相对大小而决定的 正相分配色谱的洗脱顺序为极性弱的组分先被洗脱，极性强的组分后被洗脱。 反相分配色谱与此相反，极性强的组分现出来，极性弱的组分后出柱。 离子交换色谱法 分离机制：离子交换色谱法利用被分离组分离子交换能力的差别，或选择系数的差别而实现分离。按可交换离子的电荷符号分为阳离子交换色谱法和阴离子交换色谱法。 固定相是离子交换剂，常用的有离子交换树脂和化学键合离子交换剂。 流动相是具有一定PH和离子强度的缓冲溶液，或含有少量有机溶剂，如乙醇、四氢呋喃、乙腈等，提高选择性。 影响保留行为的因素：选择性被分离离子、离子交换剂、流动相的性质 价态高的离子的保留能力强。同价态的阳离子交换剂上保留能力随其水合离子半径的增大而变小。在常温下稀溶液中阳离子在强酸性阳离子交换树脂上的保留能力的顺序是： Fe3+Al3+Ba2+≥Pb2+﹥Sr2+﹥Ca2+﹥Ni2+﹥Cd2+≥Cu2+≥Co2+≥Mg2+≥Zn2+≥Mn2+﹥Ag+﹥Cs+﹥Rb+﹥K+≥NH+﹥Na+﹥H+﹥Li+ 常见阴离子在强碱性阴离子交换树脂上的保留能力顺序通常为： 枸橼酸根＞PO43-＞SO42-＞I-＞NO3-＞SCN-＞NO2-＞Cl-＞HCO3-＞CH3COO-＞OH-＞F- 保留行为还受流动相的组成与pH值影响：交换能力强选择性系数大的离子组成的流动相具有较强的洗脱能力。增加流动相的离子强度，也能增加洗脱能力。 排阻色谱法 分离机制：根据被分离组分分子的线团尺度，或渗透系数的大小而进行分离。固定相为多孔性凝胶，故此法又称为凝胶色谱法。 按流动相的不同而分类：以有机溶剂为流动相称为凝胶渗透色谱法；以水溶液为流动相称为凝胶过滤色谱法。 凝胶是具有多孔隙网状结构的固体物质，被分离物质的分子大小不同，它们进入凝胶内部的能力不同。 当混合物溶液通过凝胶柱时，比凝胶空隙小的分子可以自由进入凝胶内部，而比凝胶空隙大的分子不能进入凝胶内部，只能通过颗粒间隙。因此移动速率有差异，分子大的物质不被迟滞，保留时间短，分子小的物质由于向孔隙沟扩散，移动被停滞，保留时间长，而达到分离。 凝胶商品的种类很多，常用的是葡聚糖凝胶和羟丙基葡聚糖凝胶。 葡聚糖凝胶（Sephadex G）亲水性，只适于水中应用，不同规格适合分离不同分子量的物质。 羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）既有亲水性又有亲脂性既可以在水中应用，也可在极性有机溶剂或它们与水组成的混合剂中膨胀使用，扩大了适用范围。 The end,thank you! * * ﹥ 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 排阻色谱法 * ﹥ * *