X3-2-2 动物细胞工程.ppt

* 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 * 细胞融合与融合诱导细胞融合物质 诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。 思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？ 仙台 病毒 紫外线 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） * 二、单克隆抗体 什么是抗体？ 　抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞产生抗体 抗原 B细胞 浆细胞 抗体 吞噬细胞 T细胞 * B淋巴细胞与抗体 １.B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生 抗体。 ２.动物体内的B淋巴细胞可以产生百万 种以上的抗体，每种抗体对特定的抗 原具有特异性免疫作用。 ３.每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 * 单克隆抗体 　　由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 　　 特点：特异性强、灵敏度高 * 如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 * 体内免疫法 多种抗原性物质 具有多种抗原决定簇 免疫血清为多克隆抗体 产生多种效应B细胞 合成和分泌多种抗体 B细胞接受刺激 传统方法获得的是多克隆抗体 * 多克隆抗体的缺陷 产量低 纯度低 特异性差 * B细胞接受刺激 合成和分泌单一抗体 体外免疫法 抗原性物质 单克隆抗体 产生特定的一种效应B细胞 单克隆抗体（杂交瘤技术） * 单克隆抗体与传统抗体比较最大的优势在于 特异性强 灵敏度高 能大量制备 * 具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养 正常淋巴细胞 （如小鼠脾细胞） 瘤细胞 （如骨髓瘤） 可以在体外长期培养，但不分泌抗体 杂交瘤细胞 既可以在体外长期培养，又能分泌抗体 设想 * * 筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。 * 单克隆抗体制备过程 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 注 射 抗 原 * 免疫小鼠 培养骨髓 瘤细胞 骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 选择培养基上培养 专一抗体检验阳性 专一抗体检验阳性 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 克隆杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞 多种杂交细胞 融合 * 思考： 1、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 * 单克隆抗体的应用 与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。 应用主要有： 1、临床诊断 2、肿瘤治疗 　　资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。 * 作为体外诊断试剂(最广泛的用途) 。制成许多种单抗诊断盒（试剂盒），准确、高效、简易、快速 把癌细胞的单克隆抗体与抗癌药物结合，制成“生物导弹” ，目标精准，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞，又不会伤害健康细胞。 * 国内装 国外装 * 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞融合原理 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性 细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 诱导方法 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 用途 获得杂种植株 制备单克隆抗体 * 知识结构小结 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法