荧光光谱技在生物大分子相互作用以及解旋酶酶促反应研究中的应用.docVIP

荧光光谱技术在生物大分子相互作用以及解旋酶酶促反应研究中的应用 【摘要】：本研究选取当前生物学领域中广泛采用的荧光光潜检测技术(如:荧光交联相关光谱技术,FCCS:荧光偏振检测技术,Florescenceanisotropy以及荧光强度衰退检测技术,Photoluminescencedecay)并深入开展其在生物大分子相互作用机制中的应用研究,研究结果与结论如下:一.荧光交联相关光谱技术及其在RecQ解旋酶活性作用研究中的应用实验选用双荧光标记互补链小片断寡聚核苷酸链作为研究底物,利用荧光交联相关光谱(FluorescenceCross-CorrelationSpectroscope,FCCS)荧光检测技术实时监控大肠杆菌RecQ以及人类RecQ5β解旋酶蛋白的酶促反应活性。结果表明荧光交联相关光谱技术FCCS适用于实时监测RecQ解旋酶蛋白的酶促反应活性。且该检测体系具有较高的灵敏性与稳定性。1)应用FCCS技术监测E.ColiRecQ解旋酶蛋白的双链DNA解链活性本实验选取高度保守的大肠杆菌E.ColiRecQ解旋酶(Xuetal.,2003)作为研究对象,并采用FCCS技术作为检测手段,监测E.ColiRecQ蛋白的酶促反应活性。研究结果表明:在一级反应条件下,E.ColiRecQ蛋白对底物的作用方式具有温度依赖性;此外,DNA底物核苷酸链的长度也会影响蛋白对底物的协同作用程