TM-084无菌检查法.docVIP

无菌检查法 起草人 审核人 审核人 批准人 部门 QC QA QC 质量管理部 姓名 饶涛 黄祥彪 汪大才 邓志军 签名 日期 分发部门： 质量管理部QC 目的 建立无菌检查的标准操作规程，规范实验操作。 范围 无菌检查的操作。 职责 QC 操作内容 4.1 概述： 无菌检查法是用于检查药典规定无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法，无菌检查的操作环境应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉淀菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。 4.2 仪器、设备和用具 4.2.1 无菌室分无菌操作室和缓冲间。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控18～26℃及除湿装置。缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外灯和照明灯，操作室或工作台应保持正压。 4.2.1.1 无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或75%乙醇或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及洁净工作台紫外灯杀菌1小时。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面。 4.2.1.2 无菌室的无菌程度检查 无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数； 沉降菌检测方法及标准见 “沉降菌检查标准操作规程” 悬浮粒子检测方法及标准见 “悬浮粒子检测标准操作规程” 4.2.1.3 无菌室内应准备好盛有消毒用0.1%新洁尔灭或75%乙醇或其他适宜消毒溶液的玻璃缸、乙醇灯、火柴、镊子、75%乙醇棉、碘酒棉及拖鞋等。 4.2.2 恒温培养箱、生化培养箱、鼓风干燥箱、集菌仪。离心机、蒸汽灭菌器 4.2.3 玻璃器皿 试管、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管(1、5、10ml)、注射器(2、5、10m1)、双碟等，用玻璃洗涤剂或清洁液浸泡，水洗3次。使用过后如与细菌接触，应先灭菌倒出内容物后再清洗，晾干。凡无菌操作过程中所用的器皿，都应用铝制饭盒装好，于121℃灭菌30分钟，或置于耐热容器中盖妥180℃干热灭菌1小时。 4.2.3.1 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管筒内或牛皮纸袋内，盖严，灭菌备用。 4.2.3.2 试管、离心管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2/3处，用牛皮纸将管口(包括塞子)包扎严，灭菌备用。 4.2.3.3 将注射器针头(9号、11号、12号)配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(瓷盘或铝制饭盒)内，盖 严，用牛皮纸包扎后，灭菌备用。 4.2.4 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。 4.2.5 长柄取样匙，放于长的玻璃筒内(或不锈钢长筒内)，盖严，干热灭菌备用。 4.2.6 封闭式滤器 由电脑集菌仪和一次性使用集菌培养器组成。前者放于无菌操作区台面上。 4.2.7 手术镊、手术剪洗净、擦干。用双层纱布将1把剪与1个镊间隔包扎在一起，放于带盖的容器(瓷盒或铝制饭盒)内，盖严，用牛皮纸包扎，灭菌备用。 4.2.8 用具的灭菌 将包扎妥的用具(除另有规定外)，在121℃±0.5℃蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌，应置恒温培养箱中烘干。适于高温灭菌的器皿也可采用180℃干热灭菌1小时。 4.3 试液 4.3.1 75%乙醇溶液配制乙醇棉球用。 4.3.2 碘酊溶液配制碘酒棉球用。 4.3.3 无菌0.9%氯化钠溶液，分装于试管、三角瓶或玻璃瓶中，瓶口用棉塞、橡胶塞或海绵胶专用塞塞紧并用牛皮纸包扎，灭菌备用。也可用氯化钠注射液。 4.3.4 0.1%新洁尔溶液、75%乙醇、2mol/L盐酸溶液、2mol/L氢氧化钠溶液。 4.4 培养基 4.4.1 0.9%氯化钠溶液 4.4.2 0.1%蛋白胨水溶液 4.4.3 PH 7.0 氯化钠—蛋白胨缓冲溶液 4.4.4 流体硫乙酸盐培养基、改良马丁培养基配制时按照“培养基配制标准操作规程”进行配制。 4.5 灵敏度检查 按照“培养基灵敏度检查标准操作规程”进行检查。 4.6 方法验证实验 当建立药品的无菌检