第9章 基因工程基本技术.ppt

第九章　基因工程基本技术 保证DNA一级结构的完整性 排除其它分子的污染 RNA、蛋白质、多糖等 基因组DNA的提取 CTAB法 SDS法 质粒DNA的提取 碱裂解法 煮沸法 线粒体、叶绿体DNA的提取 差速离心结合SDS裂解法 3、基因组DNA提取主要方法 CTAB法 适用于植物组织，真菌等 SDS法 适用于动物组织，血液，细胞，细菌，酵母等 CTAB法 (植物DNA提取经典法) CTAB法流程图 SDS法 原理 SDS 阴离子去垢剂 高温（55～65℃）裂解细胞，蛋白变性，染色体离析 高盐(KAc或NH4Ac) 或降低温度（冰浴） 使蛋白质及多糖杂质沉淀 上清液中的DNA用酚/氯仿抽提 乙醇沉淀水相中的DNA 基因组DNA 新鲜材料，低温保存 血液基因组DNA提取选择有核细胞 细胞培养时间不能过长 含病毒的液体材料提取前先富集 质粒DNA 对数期的菌体 培养时应加入筛选压力 低拷贝或大质粒，应加大菌体用量 菌株不要频繁转接（质粒丢失） 基因组DNA 材料过多影响裂解，导致DNA量少，纯度低 针对不同材料，选择适当的裂解预处理方式： 植物材料－－液氮研磨 动物组织－