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HPLC的结构、原理及日常维护 刘浩然 内容简介 HPLC的硬件结构 HPLC的原理 HPLC日常维护要点 一、概　述 HPLC即 High performance liquid chromatography, 或 High pressure liquid chromatography，译为：高效液相或高压液相。 HPLC是20世纪60～70年代发展起来的分离分析工具。是有机化合物分析、药物分析的常用仪器。 约80％左右的药物可用HPLC检测。 二、HPLC主要知名品牌 沃特斯（Waters　 安捷伦（Agilent） 岛津（Shimazu） 其它：戴安、菲尼根、热电等。 三、HPLC的基本结构 常见HPLC结构外观 Thermo fisher液相色谱－质谱联用 大连依利特 北京北分 上海伍丰 江苏天瑞LC310　 北京东西分析 莱伯泰科HPLC HPLC结构的几种形式 串联式二元高压泵系统 并联式二元高压泵系统 四流路串联式单高压泵系统 分离部分 分离部分由高压输液泵、色谱柱及相关组件组成。 由高压输液泵吸取流动相，使之进入色谱柱，由进样器注入样品后，由色谱柱进行分离。 在高压输液泵之前常用脱气机。 在色谱柱部分要装柱温箱保持色谱柱的温度恒定。 高压输液泵 目前HPLC配备高压输液泵大致有两种类型： 一种是两个高压输液泵，各自输送流动相后进入混合器。俗称“二元高压泵”。 另一种是只有一个高压输液泵，在这个输液泵之前配备一个电磁阀控制流路，通常这种形式的泵有四个流路。俗称“四元低压泵”。但其实质上仍是单泵。 本室有两台岛津的HPLC，均为四元低压的单泵。有两台安捷伦HPLC，其中一台为四元低压的单泵，另一台为二元高压泵。 高压输液泵（外观） 高压输液泵（内部） 高压输液泵原理 单向阀实物 在同一个轴上有两个相位相差180度的偏心轮，当其中一个吸液时，另一个排液。交替进行。这样就减少了输液的脉动。 Purge阀 Purge阀主要用于两个方面： 1 刚开机时，要打开Purge阀(逆时针方向拧180度)，启动高压输液泵冲洗约３～5min，排掉一段流动相以去除管腔中的气泡． 2更换不同的流动相时，要将前面一段流动相排尽。 开启Purge阀时，一般用较高的流速（5ml/min）来冲洗管腔。 混合器 混合器的作用 混合器主要是用来混匀流动相的。 流动相不均匀对检测影响很大。 混合器通常是通过一些U形管来使流动相混匀，即“蛇形管”模式。也有的是采用一些过滤介质来实现的。由于在混合过程中没有动力装置，故称为“静态混合”。 此外，好的混合器可使仪器系统压力比较恒定。 岛津20AT型HPLC 脱气机 脱气机原理 为什么要脱气？因为流动相中可溶解一定的空气。如果不脱气，在检测器中气泡会冒出来，严重影响检测基线。 脱气机由真空泵、真空度检测器及脱气腔组成。 流动相通过含氟树脂为材料的管状膜，其中的气体可通过膜被真空泵抽去，而液体保留下来。 脱气机内部构造 柱温箱 柱温箱是保障色谱柱在恒定的温度下工作的前提条件，也是HPLC结果重现性的保障． 没有柱温箱是很难进行定性定量分析的．因为温度可影响物质的保留时间，峰形等参数． 除制备型HPLC以外，一般分析型HPLC都要有柱温箱． 安捷伦自带的卧式柱温箱 色谱柱 色谱柱可分为正相色谱柱、反相色谱柱、特殊专用柱（手性色谱柱、离子色谱柱、 氨基酸分析柱、糖类分析柱等） 操作仪器前一定要认清是什么型号、什么材质的色谱柱！否则，乱用流动相，一次就可导致色谱柱报废！如：环糊精为填料的手性色谱柱，如果流动相含有水，即可溶解，一次性报废！ 反相色谱柱 目前最常用的为反相色谱柱。 反相色谱柱一般是以硅胶颗料上键合C18、C8而成。常用的为C18。 C18反相色谱柱适合分离很多物质，且色谱柱较为耐用。 C18注意事项 但流动相PH值一定要保证在2~8之间。低于２或高于８，色谱柱即遭破坏。 反相色谱柱一定不能用纯水作流动相，否则键合的C18坍塌，报废！ 流动相中水的比例最大为90%。 液相色谱柱 色谱柱不能震动、跌落！ 色谱柱不用时，从仪器上取下后要用适当的溶剂保存，并在两端拧上堵头！ 如何认识不同型号仪器的构造？ 无论何种HPLC，其结构总离不开高压输液泵、进样器、柱温箱、检测器几个部分。 搞清仪器不同部分的作用是做好实验和维护仪器的前提！ 共用一个机箱的串联式二元高压输液泵（典型代表是安捷伦） 并联式二元高压输液泵 这种形式的输液泵制造工艺要求比串联泵更高。 Waters公司是以做并联泵为主要产品的。 岛津近期也推出了并联泵产品，如：LC-20AD 国产HPLC中只有极少数厂家生产：如：上海伍丰、江苏天瑞等。 四流路单高压输液泵的HPLC（典型代表为安捷伦） 分析部分 分